[發明專利]在微量細胞中檢測多種微量元素的方法及應用

有效

• 申請號: 202110493989.4
• 申請日: 2021-05-07
• 公開（公告）號: CN113237942B
• 公開（公告）日: 2023-09-26
• 發明（設計）人: 岑慧枝;張葆荔;施惠娟
• 申請（專利權）人: 上海科技大學
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 徐俊

1.一種通過在微量細胞中檢測多種宏量與微量元素用于評估細胞功能質量的方法，其特征在于：包括取得體細胞離心去上清液，用稀釋液稀釋至檢測濃度在3x10⁶/ml以下,上機檢測；使用單細胞電感耦合等離子質譜SC-ICP-MS方法，對單細胞水平的多種元素進行分析；采用評估特定細胞的特異元素的SC-ICP-MS單個信號動力學的特征，包括駐留時間、單信號的峰值時間及其與駐留時間比值、峰值前動力常數與面積和峰值后動力常數與面積細胞獨特性的元素特性信號特征評估細胞的功能質量。

2.如權利要求1所述的方法在評估活的或是去活的人精子細胞中的應用。

3.如權利要求1所述的方法在評估多種形態和類型的細胞中的應用，包括所有不限種屬、不限生理狀況的體細胞、配子細胞、原核細胞、以及含精液、生殖道液、卵泡液、血液、尿液、唾液和大便中可分離的細胞。

4.一種通過在人精子細胞中檢測多種微量元素用于評估人精子細胞功能質量的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1：樣本準備：將新鮮的或是獲能前或是獲能后的人精液按常規方法液化后離心，分離精漿與精子，用4％PFA將精子重懸固定十五分鐘，再把固定液清洗后，可直接使用或放于4攝氏度保存備用；

步驟2：用稀釋液稀釋至檢測濃度在3x10⁶/ml以下；

步驟3：上機檢測：安裝特定的單細胞霧化器和霧室后，首先用調諧液，調諧液為2％v/v硝酸中含有10μg/L的Li、Be、Mg、Fe、In、Ce、Pb和U，對ICP-MS儀器進行調諧以確定儀器檢測參數，然后用金顆粒標準品確定單細胞傳輸效率，傳輸效率在40％-60％范圍；配制不同濃度待測元素的標準溶液繪制校準曲線，所有濃度標準溶液均在超純水中配制；為了消除多原子干擾，獲得高信噪比，在動態反應池模式下，以氨氣為反應氣體，分別測定了單細胞中的K、Ca、Cr和Fe；以氧氣為反應氣體，分別測定了單細胞中的As和Se，并以氧化反應產物AsO和SeO為分析物種進行檢測；其他元素在標準模式下測定；樣本在50μs的駐留時間下采集50s，所檢測的18個元素消耗的總樣本體積約為400μL；

步驟4：評估特定細胞的特異元素的SC-ICP-MS單個信號動力學的特征，包括駐留時間、單信號的峰值時間及其與駐留時間比值、峰值前動力常數與面積和峰值后動力常數與面積細胞獨特性的元素特性信號特征；

步驟5：評估細胞的功能質量。