[發(fā)明專利]一種復合固氮微生物菌劑及其制備方法與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110493100.2
• 申請日: 2021-05-06
• 公開（公告）號: CN113337420A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈家葆;李華一
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東麗豪生物農(nóng)業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C05F11/08;C05G3/80;C12R1/065;C12R1/41;C12R1/01
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

1.一種復合固氮微生物菌劑，其特征在于，所述微生物菌劑是由固氮菌、嗜氫菌和促生根瘤菌接種于改良BPY培養(yǎng)基中經(jīng)液體發(fā)酵得到的混合發(fā)酵液；所述混合發(fā)酵液中上述三種單株菌的有效活菌數(shù)均不低于1×10⁶CFU/mL；所述混合發(fā)酵液中總有效活菌數(shù)不低于1×10⁹CFU/mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述復合固氮微生物菌劑，其特征在于，所述混合發(fā)酵液總活菌數(shù)中，固氮菌活菌數(shù)所占比例為10％～40％，嗜氫菌活菌數(shù)所占比例為20％～50％；促生根瘤菌活菌數(shù)所占比例為10％～40％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述復合固氮微生物菌劑，其特征在于，所述固氮菌為巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)、蜜糖草固氮螺菌(Azospirillum melinis)、圓褐固氮螺菌(Azotobacter chroococcum)中的至少一種；所述嗜氫菌為非典型氫嗜孢菌(Hydrogenophaga atypica)、黃色氫嗜孢菌(Hydrogenophaga flava)、萊紳士氫嗜孢菌(Hydrogenophaga laconesensis)、假黃氫嗜孢菌(Hydrogenophaga pseudoflava)、污水氫嗜孢菌(Hydrogenophaga defluvii)、土壤氫嗜孢菌(Hydrogenophaga soli)中的至少一種；所述促生根瘤菌為動膠菌樣申氏菌(Shinella zoogloeoides)、雞眼草申氏菌(Shinella kummerowiae)、谷粒申氏菌(Shinella granuli)中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述復合固氮微生物菌劑，其特征在于，所述固氮菌為巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)；所述嗜氫菌為非典型氫嗜孢菌(Hydrogenophaga atypica)；所述促生根瘤菌為動膠菌樣申氏菌(Shinella zoogloeoides)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述復合固氮微生物菌劑，其特征在于，所述巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)為編號CGMCC:1.10379的菌株；所述非典型氫嗜孢菌(Hydrogenophaga atypica)為編號CGMCC:1.13009的菌株；所述動膠菌樣申氏菌(Shinellazoogloeoides)為編號CGMCC:1.6838的菌株。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述復合固氮微生物菌劑，其特征在于，所述改良BPY培養(yǎng)基以水為介質(zhì)，包括如下組分：3.75～6.25g/L蛋白胨、1.13～1.88g/L牛肉浸取物、7.50～12.5g/L蔗糖、0.12～0.19g/L酵母提取物、1.88～3.13g/L NaCl、0.2g/L KH₂PO₄、0.8g/L K₂HPO₄、0.075～0.125g/L七水硫酸鎂、0.038～0.063g/L二水硫酸鈣、0.00005～0.0005g/L氯化鐵、0.00005～0.0005g/L鎢酸鈉、0.00005～0.0005g/L鉬酸鈉、0.00005～0.0005g/L硫酸錳。

7.權(quán)利要求1所述復合固氮微生物菌劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)固氮菌、嗜氫菌、促生根瘤菌分別于相應(yīng)的培養(yǎng)基中進行單獨培養(yǎng)，分別制得固氮菌發(fā)酵液、嗜氫菌發(fā)酵液和促生根瘤菌發(fā)酵液：所述固氮菌發(fā)酵液、嗜氫菌發(fā)酵液、促生根瘤菌發(fā)酵液中相應(yīng)的固氮菌、嗜氫菌、促生根瘤菌的活菌數(shù)不低于2×10⁸CFU/mL；

(2)將步驟(1)中制得的固氮發(fā)酵液、嗜氫菌發(fā)酵液、促生根瘤菌發(fā)酵液等量加入改良BPY培養(yǎng)基中，于26～30℃、150～200rpm/min條件下，發(fā)酵24～48h制得混合發(fā)酵液，混合發(fā)酵液中上述三種單株菌的活菌數(shù)均不低于1×10⁶CFU/mL；所述混合發(fā)酵液中總活菌數(shù)不低于1×10⁹CFU/mL。