[發(fā)明專利]穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110492685.6
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113151356A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉雅靜;曹云霞;王夢瑤;宗凱;紀(jì)冬梅;梁丹;杜馨;張文香;魏兆蓮;周平
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;C12N15/62
• 代理公司: 合肥市上嘉專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34125
• 代理人: 李璐

1.一種穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將CHO細(xì)胞在DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中進行體外培養(yǎng)；

(2)利用轉(zhuǎn)染試劑將不同的人源ApoE質(zhì)粒ApoE2-EGFP、ApoE3-EGFP、ApoE4-EGFP和對照組質(zhì)粒N1-EGFP轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞中；

(3)4—6小時更換新的培養(yǎng)基，24—48小時后加入陽性篩選試劑G418；

(4)篩選轉(zhuǎn)染陽性的ApoE2-EGFP、ApoE3-EGFP、ApoE4-EGFP和對照N1-EGFP細(xì)胞株；

(5)對篩選出的陽性細(xì)胞進行鑒定，獲得穩(wěn)定表達(dá)人源ApoE2-EGFP，ApoE3-EGFP和ApoE4-EGFP的CHO細(xì)胞株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述細(xì)胞培養(yǎng)基是含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，體外培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為37℃、含5％CO₂恒溫培養(yǎng)箱中進行。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述轉(zhuǎn)染試劑為Lipofectamine 2000。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述陽性篩選試劑G418的濃度為600μg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，在步驟(4)中，篩選細(xì)胞的方法是利用分選流式細(xì)胞儀，細(xì)胞篩選的要求是各組細(xì)胞密度達(dá)到(3—5)×10⁶個/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，在步驟(5)中，對篩選出的陽性細(xì)胞進行鑒定的方法包括利用激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀、Western Blot檢測各組細(xì)胞中ApoE的表達(dá)。

8.利用權(quán)利要求1至7任一項所述的穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系的制備方法制備出的穩(wěn)定表達(dá)人源不同ApoE的CHO細(xì)胞系。