[發明專利]企鵝珍珠貝Tyr基因的啟動子及其應用

有效

• 申請號: 202110492284.0
• 申請日: 2021-05-06
• 公開（公告）號: CN113201543B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 于非非;曲炳良;鐘智明;劉永;余祥勇;王梅芳;陳家宇
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 劉瑤云;陳偉斌

本發明公開了企鵝珍珠貝Tyr基因的啟動子及其應用。具體公開了一種企鵝珍珠貝Tyr基因的啟動子，以及相應的重組載體和重組293T細胞系。在此基礎上，本發明還提供了一種鑒定企鵝珍珠貝Tyr轉錄因子的方法。通過將構建的Tyr?promoter?luc重組載體與含待鑒定轉錄因子基因序列的表達載體共轉染293T細胞系，測定細胞中熒光素酶活性的方法，可以確定企鵝珍珠貝的其它黑色素相關基因是否為黑色素合成關鍵基因Tyr的轉錄因子。本發明克服了尚未有用于篩選鑒定企鵝珍珠貝Tyr轉錄因子的啟動子及質粒的缺陷，對Tyr轉錄因子的鑒定和企鵝珍珠貝的黑色素合成信號通路的構建具有重要意義。

技術領域

本發明屬于水產科學和基因工程技術領域，更具體地，涉及企鵝珍珠貝Tyr基因的啟動子及其應用。

背景技術

企鵝珍珠貝(Pteria penguin)是一種用于培育大型海水珍珠的優質母貝，其所產天然珍珠以古銅色或藍綠色為主。企鵝珍珠貝中的黑色素含量豐富，調控減少企鵝珍珠貝黑色素的含量，有望優化其珍珠質色澤，生產業界推崇的金色系列珍珠和彩虹珍珠，突破我國海水珍珠品質較低、色澤單一的產業瓶頸，而珍珠質色澤形成機制的研究是色澤調控的前提條件。

企鵝珍珠貝的黑色素合成具有復雜的信號通路，其中酪氨酸酶(tyrosinase，Tyr)是關鍵的限速酶，對黑色素的合成起決定性作用，其表達量可影響黑色素含量。Tyr可能受多個轉錄因子調控，Tyr轉錄因子可通過調控Tyr表達進而調控黑色素的合成，因此，對Tyr轉錄因子的篩選鑒定是構建企鵝珍珠貝黑色素合成信號通路，實現對黑色素合成進行調控的重要部分。中國專利CN110184323A公開了一種香蕉水通道蛋白基因啟動子轉錄因子的鑒定方法，但目前尚無可用于篩選鑒定企鵝珍珠貝Tyr轉錄因子的啟動子及質粒，這嚴重阻礙了Tyr轉錄因子的鑒定和信號通路的構建。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有上述技術的缺陷和不足，提供企鵝珍珠貝Tyr基因的啟動子及其應用。

本發明的第一個目的是提供一種企鵝珍珠貝Tyr基因的啟動子。

本發明的第二個目的是提供一種鑒定企鵝珍珠貝Tyr轉錄因子的方法。

本發明的第三個目的是提供企鵝珍珠貝Tyr基因的啟動子在鑒定Tyr轉錄因子中的應用。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

本發明首先通過構建企鵝珍珠貝基因組Walker文庫，克隆Tyr啟動子區域序列并分析，獲得啟動子序列。然后通過構建Tyr啟動子驅動的熒光素酶報告基因重組載體，將構建的重組載體轉染至293T細胞系，對獲得的啟動子序列的功能進行驗證，結果表明所得啟動子為Tyr強啟動子。

因此，本發明申請保護以下內容：

一種企鵝珍珠貝Tyr基因的啟動子，其序列如SEQ ID NO.1所示。

一種重組載體，其載體中含有SEQ ID NO.1所示序列。

一種重組細胞系，其含有上述重組載體。

優選地，所述重組載體的表達載體為pGL3-Basic熒光素報告基因載體。

優選地，所述細胞系為293T細胞系。

通過將本發明所構建的Tyr-promoter-luc重組載體與含待鑒定轉錄因子基因序列的表達載體共轉染293T細胞系，測定細胞中熒光素酶活性的方法，可以確定企鵝珍珠貝的其它黑色素相關基因是否為黑色素合成關鍵基因Tyr的轉錄因子。因此，本發明還申請保護所述啟動子，所述重組載體，所述重組細胞系在鑒定企鵝珍珠貝Tyr轉錄因子中的應用。

本發明還提供了一種鑒定企鵝珍珠貝Tyr轉錄因子的方法，其包含以下步驟：

S1.構建目的基因重組載體；