[發明專利]一種生產高酶活力靈芝漆酶的菌種和生產方法

有效

• 申請號: 202110491079.2
• 申請日: 2021-05-06
• 公開（公告）號: CN113215001B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 劉鐵平;孫勇;孫怡凱
• 申請（專利權）人: 上海禾向健康科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

1.一種生產高酶活力靈芝漆酶的菌種，其特征在于，所述菌種為四川靈芝(ganodermasichuanense)藏靈芝二號；所述藏靈芝二號的保藏編號為CGMCC NO.21936。

2.一種生產高酶活力靈芝漆酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將權利要求1所述菌種進行擴繁培養，得到發酵菌種；所述擴繁培養包括菌種活化、搖床培養、一級放大和二級放大；

將發酵菌種接種到發酵培養基上進行發酵培養，得到酶活力為20.581～21.23U/ml的靈芝漆酶的粗酶液；

所述菌種活化的培養基包括以下重量份的組分：蛋白胨2～2.5份、葡萄糖20～25份、磷酸二氫鉀0.4～0.5份、磷酸氫二鉀1.0～1.2份、七水硫酸鎂0.5～0.6份、維生素B10.01～0.02份、瓊脂18～20份和水1000份；所述搖床培養的培養基為不含瓊脂的菌種活化培養基；

所述一級放大的培養基、二級放大的培養基和發酵培養基均包括以下重量百分含量的組分：玉米淀粉2％～3％、葡萄糖1.5％～3％、磷酸二氫鉀0.1％～0.2％、硫酸鎂0.05％～0.1％、酵母粉0.2％～0.4％、豆油0.05％～0.1％和余量的水。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述擴繁培養和發酵培養的溫度均為26～28℃。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述菌種活化的時間為20～30d。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述搖床培養的時間為5～7d；所述搖床培養的振蕩速度為100～200rpm。

6.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述發酵培養的條件包括：通氣量為1～2V/V·min，攪拌速度為100～120rpm。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，得所述粗酶液后，還包括提取和純化處理；所述提取和純化處理包括：壓濾、硫酸銨沉淀、透析和層析；所述壓濾的壓力為50～60kg。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述硫酸銨沉淀的方法包括：將壓濾后得到的液體與40wt.％的硫酸銨混合，得到第一粗靈芝漆酶和上清液；

將上清液與80wt.％硫酸銨混合，得到第二粗靈芝漆酶和上清液；

將第一粗靈芝漆酶和第二粗靈芝漆酶混合，得到粗靈芝漆酶。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述層析的裝置包括葡聚糖G-100凝膠柱；所述層析的流速為0.5ml/min。