[發明專利]提高解淀粉芽孢桿菌芽孢萌發率及對蛋白培養基適應性的方法

在審

• 申請號: 202110488711.8
• 申請日: 2021-05-06
• 公開（公告）號: CN113201476A
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 馬海樂;阮思煜;王禹程;李云亮;趙博博;劉曉霜;徐雅宣
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N3/00;C12N1/36;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.提高解淀粉芽孢桿菌芽孢萌發率方法，其特征在于按照如下步驟進行：

(1)芽孢制備：將活化的解淀粉芽孢桿菌菌液，細菌濃度達到或超過10⁸cfu/mL；平鋪涂布于營養肉湯固態培養基，在37℃條件下培養10d，再在20℃條件下培養2d；培養結束后用無菌蒸餾水浸沒培養基5min，用接種環刮下菌落形成懸浮液；收集懸浮液，在4℃、1000g的條件下離心15min，共計3輪，每輪結束后棄去上清，用無菌蒸餾水重懸浮沉淀，以清洗芽孢表面雜質；最后一次離心后，控制無菌蒸餾水添加量，使芽孢懸液中芽孢濃度達到10⁷～10⁸cfu/mL，于4℃冰箱中保存；

(2)芽孢萌發：將芽孢懸液稀釋至10⁶cfu/mL，作為芽孢懸液母液；按照1:99的體積比用無菌蒸餾水稀釋芽孢懸液母液，取6L稀釋后的芽孢懸液注入超聲設備的超聲腔內，在超聲頻率為20～60kHz、功率密度為10～50W/L的條件下處理15～30min，處理時超聲腔內芽孢懸液保持37℃；隨后將芽孢懸液置于37℃下溫育20min，之后轉移至70℃水浴鍋再進行10min熱處理，即可達到提高解淀粉芽孢桿菌芽孢萌發率的目的。

2.根據權利要求1所述的提高解淀粉芽孢桿菌芽孢萌發率方法，其特征在于所述的營養肉湯固態培養基成分為：營養肉湯培養基粉末18g/L，瓊脂15g/L，MnCl₂ 0.5g/L，pH 7.2。

3.提高解淀粉芽孢桿菌對蛋白質培養基適應性的方法，其特征在于按照下述步驟進行：

(1)菌種活化：取-80℃超低溫保藏的菌株，劃線接種于固體培養基；

(2)種子液制備：從固體培養基上挑取單菌落，接種至酪蛋白液體培養基或者大豆蛋白液體培養基中，于30～35℃、160r/min搖床中培養24h，即得種子液；

(3)發酵培養：將種子液接種于裝有酪蛋白培養基的三角錐形瓶中，其中接種量為1％～5％(體積比)，30～35℃搖床中培養至2～6h后，將三角錐形瓶置于超聲設備中，同時進行一個低強度短時間的超聲處理和熱激處理；然后繼續放回搖床中培養至24h，即可達到提高解淀粉芽孢桿菌對蛋白質培養基適應性的目的。

4.根據權利要求3所述的提高解淀粉芽孢桿菌對蛋白質培養基適應性的方法，其特征在于步驟(1)中的固體培養基成分如下：胰蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，NaCl 5g/L，瓊脂20g/L，pH 7.0。

5.根據權利要求3所述的提高解淀粉芽孢桿菌對蛋白質培養基適應性的方法，其特征在于步驟(2)中的酪蛋白液體培養基成分為：Na₂HPO₄·12H₂O 1.43g/L，干酪素5g/L，KH₂PO₄0.36g/L，pH 7.0；大豆蛋白液體培養基成分為：Na₂HPO₄·12H₂O 1.43g/L，大豆蛋白5g/L，KH₂PO₄ 0.36g/L，pH 7.0。

6.根據權利要求3所述的提高解淀粉芽孢桿菌對蛋白質培養基適應性的方法，其特征在于步驟(3)中的超聲處理和熱激處理參數如下：處理時間為5～20min，超聲功率密度為10～60W/L，超聲頻率為20～60kHz，熱激溫度為40～45℃。