[發明專利]一種有機磷農藥活菌降解劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202110485430.7
• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113355267A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 余姝僑;陳紅;黃錦泉;吳曉琳
• 申請（專利權）人: 深圳技師學院（深圳高級技工學校）
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C09K17/14;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙) 44248
• 代理人: 覃迎峰

1.一種有機磷農藥活菌降解劑，其特征在于：其采用pLEV1-TorA-mpd質粒轉化到大腸桿菌中擴增培養得到，所述pLEV1-TorA-mpd質粒的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如權利要求1所述的有機磷農藥活菌降解劑的制備方法，其特征在于：其包括如下步驟：

步驟S11，構建生產有機磷水解酶的表達載體；

步驟S12，將啟動子bba_J23116、光敏融合蛋白 LEV1和兩個大腸埃希氏菌終止子rrnB插入到所述光控基因表達載體的RI 和II 酶切位點，獲得pLEV1質粒；

步驟S13，將pColE啟動子、甲基對硫磷水解酶基因mpd和轉移信號肽，插入到pLEV1質粒中的KpnI 和Bglll的酶切位點中，獲得pLEV1-TorA-mpd質粒；

步驟S14，將pLEV1-TorA-mpd轉化到大腸桿菌菌株中進行擴增培養，得到有機磷農藥活菌降解劑。

3.根據權利要求2所述的有機磷農藥活菌降解劑的制備方法，其特征在于：步驟S11中，所述生產有機磷水解酶的表達載體的骨架為pCDFDuet1，所述表達載體不含啟動子和 MCS序列。

4.根據權利要求2所述的有機磷農藥活菌降解劑的制備方法，其特征在于：步驟S13中，所述大腸埃希氏菌終止子rrnB從pBAD/His 載體獲得；所述甲基對硫磷水解酶基因mpd從假單胞菌WBC-3中獲得；所述轉移信號肽為TorA。

5.根據權利要求2所述的有機磷農藥活菌降解劑的制備方法，其特征在于：步驟S14中，所述大腸桿菌菌株為BL21菌株。

6. 一種有機磷農藥活菌降解劑，其特征在于：其采用pLEV1-TorA-mpd-supernova質粒轉化到大腸桿菌中擴增培養得到，所述pLEV1-TorA-mpd-supernova為在pLEV1-TorA-mpd質粒上引入自殺基因supernova得到，所述質粒pLEV1-TorA-mpd-supernova的序列如SEQ IDNO.2所示。

7.如權利要求6所述的有機磷農藥活菌降解劑的制備方法，其特征在于：其包括如下步驟：

步驟S21，構建生產有機磷水解酶的光控基因表達載體；

步驟S22，將組成型啟動子、光敏融合蛋白 LEV1和兩個大腸埃希氏菌終止子rrnB插入到所述光控基因表達載體的RI 和II 酶切位點，獲得 pLEV1質粒；

步驟S23，將pColE啟動子、甲基對硫磷水解酶基因mpd和轉移信號肽，插入到pLEV1質粒中的KpnI 和Bglll的酶切位點中，獲得pLEV1-TorA-mpd質粒；在pLEV1-TorA-mpd質粒上引入自殺基因supernova，得到質粒pLEV1-TorA-mpd-supernova；

步驟S24，將質粒pLEV1-TorA-mpd-supernova轉化到大腸桿菌菌株中，37℃黑暗擴增培養，得到有機磷農藥活菌降解劑。

8.根據權利要求7所述的有機磷農藥活菌降解劑的制備方法，其特征在于：步驟S21中，所述生產有機磷水解酶的表達載體的骨架為pCDFDuet1，所述表達載體不含啟動子和 MCS序列。