[發明專利]一種高忠實性DNA聚合酶及其制備方法和PCR應用

有效

• 申請號: 202110484455.5
• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113151213B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 劉喜朋;翁妍;王風平
• 申請（專利權）人: 上海交通大學;中國大洋礦產資源研究開發協會（中國大洋事務管理局）
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N1/21;C12N15/70;C12Q1/686;C12R1/19
• 代理公司: 上海恒慧知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 31317
• 代理人: 張寧展

1.一種高忠實性DNA聚合酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種編碼權利要求1所述高忠實性DNA聚合酶的基因，其特征在于，其核苷酸序列表如SEQ ID NO.2所示。

3.含權利要求1所述高忠實性DNA聚合酶的重組表達菌。

4.根據權利要求3所述的重組表達菌，其特征在于，所述重組表達菌為大腸桿菌。

5.一種如權利要求1所述高忠實性DNA聚合酶的基因的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)對權利要求3所述重組表達菌進行擴大培養、誘導表達；

(2)收集誘導培養后的菌體，進行細胞破碎、離心，得到細胞裂解液上清；

(3)對上清液進行鎳離子親和純化和離子交換純化，得到所述DNA聚合酶。

6.一種如權利要求1所述高忠實性DNA聚合酶在PCR中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述PCR應用中包含PCR反應緩沖液。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述PCR反應緩沖液含20mM Tris-HCl或pH值為8.2的Tricine-NaOH，3mM MgCl₂，40mM KCl，4mM(NH₄)₂SO₄，0.01％Triton X-100和0.005％BSA。