[發明專利]一種H9N2亞型禽流感新型標記疫苗的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202110481512.4
• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113398259A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 叢彥龍;孫藝學;宿甲子;鄧效禹;李佳新;凌蒙蒙;秦佳儀;王瑋
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61P31/16;C12N15/44;C12N15/866;C12N5/10
• 代理公司: 北京華際知識產權代理有限公司 11676
• 代理人: 曹書華

本發明屬于疫苗研制技術領域，具體為一種H9N2亞型禽流感新型標記疫苗的制備方法及其應用，該VLPs由H9N2亞型禽流感病毒HA蛋白和M1蛋白自行組裝形成的空心化結構的蛋白顆粒；因為該VLPs免疫后僅能刺激機體產生特異性的H9N2亞型禽流感病毒的HA抗體和M1抗體，而不會產生針對H9N2亞型禽流感病毒的PB2、PB1、PA、NP、NA、M和NS的抗體，所以其可以作為標記疫苗用于區分臨床上H9N2亞型禽流感病毒的野毒感染和滅活疫苗免疫；因此，利用該VLPs進行免疫，可以為H9N2亞型禽流感的凈化提供技術支持。

技術領域

本發明涉及疫苗研制技術領域，具體為一種H9N2亞型禽流感新型標記疫苗的制備方法及其應用。

背景技術

禽流感是由A型流感病毒感染引起的家禽和野生禽類的高度接觸性傳染病。根據禽流感病毒致病性的高低，可以將禽流感分為高致病性、低致病性和非致病性。引起H9N2亞型禽流感的病原屬于低致病性流感病毒，雖然其致死率不高，但常導致家禽呼吸道癥狀、產蛋率下降，且容易引起并發感染，給養禽業造成嚴重的經濟損失。疫苗免疫是預防禽流感最有效和最經濟的手段，對提高我國的禽病防制水平，保障我國養禽業的健康發展具有十分積極的意義。目前國內用來預防H9N2亞型禽流感的疫苗主要是滅活疫苗。滅活疫苗制備技術有其優點，但亦存在著很大的缺陷。由于禽流感病毒易突變，且雙重及多重亞型病毒之間易發生遺傳物質重組及抗原漂移，使滅活疫苗的長期安全性及有效性受到了極大挑戰，難以應付新的突變型禽流感病毒的傳染，因此研制更有效的疫苗來預防和控制H9N2亞型禽流感至關重要。

由于病毒樣顆粒疫苗的免疫效果及其安全性優于滅活疫苗，因此成為近年的研究熱點。病毒樣顆粒(virus-like particles，VLPs)是由某種病毒的一個或多個結構蛋白自行裝配而成的高度結構化的空心蛋白顆粒，不含病毒核酸，無法自主復制，不存在基因重組或重配和毒力回復的可能，安全性高，可模擬病毒粒子的天然結構，能夠激活細胞免疫和體液免疫，誘導的免疫保護更為全面。利用桿狀病毒表達系統在昆蟲懸浮細胞中能夠大規模生產VLP疫苗。由于桿狀病毒表達系統不依賴雞胚生產，能夠保證禽流感大流行時疫苗的充足供應，且具有成本低、對環境友好、生產周期短、安全性高等優勢，因此利用桿狀病毒表達系統生產的VLP疫苗具有較大的應用潛力。

前期研究發現利用流感病毒的四種蛋白，即M1、M2、NA和HA，可以組裝形成流感病毒VLPs，因此，當時對流感病毒VLPs的相關研究主要集中在這四種結構蛋白上面。后來研究表明，用流感糖蛋白(單獨HA或HA和NA)和基質蛋白M1構建的禽流感VLPs，同樣能夠刺激機體產生大量的特異性抗體，且被免疫的實驗動物均能抵抗同源或異源同亞型病毒的攻擊。因此，在構建禽流感VLPs時，當HA和M1在細胞中共表達時，無論是否有NA，都會自發形成VLPs。

據此，本發明利用昆蟲-桿狀病毒表達系統，使H9N2亞型禽流感病毒HA 蛋白和的M1蛋白在該系統中自行組裝形成空心化結構的VLPs。因為該VLPs 免疫后僅能刺激機體產生特異性的H9N2亞型禽流感病毒的HA抗體和M1抗體，而不會產生針對H9N2亞型禽流感病毒的PB2、PB1、PA、NP、NA、M和 NS抗體，所以其可以作為標記疫苗用于區分臨床上H9N2亞型禽流感病毒的野毒感染和滅活疫苗免疫。因此，利用該VLPs進行免疫，可以為H9N2亞型禽流感的凈化提供技術支持。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施方式的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施方式。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

因此，本發明的目的是提供一種H9N2亞型禽流感新型標記疫苗的制備方法及其應用，能夠實現利用該VLPs進行免疫，可以為H9N2亞型禽流感的凈化提供技術支持。

為解決上述技術問題，根據本發明的一個方面，本發明提供了如下技術方案：

一種H9N2亞型禽流感新型標記疫苗的制備方法及其應用，其包括如下步驟：