[發(fā)明專利]一種遠(yuǎn)緣雜交誘導(dǎo)胚發(fā)育直接創(chuàng)制甜瓜雙單倍體的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110480062.7
• 申請(qǐng)日: 2021-04-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113080055B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢春桃;黃耀;劉麒;陳靜;張春靜;孫博文;孫亞亭;婁群峰;李季;陳勁楓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H1/02
• 分類號(hào): A01H1/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 張俊范

本發(fā)明公開(kāi)了一種遠(yuǎn)緣雜交誘導(dǎo)胚發(fā)育直接創(chuàng)制甜瓜雙單倍體的方法，包括包括以下步驟：步驟1、取黃瓜雄花與甜瓜雌花進(jìn)行授粉，授粉后對(duì)雌花進(jìn)行套袋隔離，同時(shí)在果柄處噴施氯吡脲水溶液；步驟2、授粉后的4～5h，在子房基部噴施噻苯隆溶液；步驟3、收獲種瓜后取相對(duì)飽滿種子在培養(yǎng)基中進(jìn)行胚拯救獲得再生植株；步驟4、對(duì)再生植株進(jìn)行煉苗、移栽，隨后正常管理。本發(fā)明將氯吡脲和噻苯隆聯(lián)合用于遠(yuǎn)緣雜交誘導(dǎo)，降低了基因型對(duì)單倍體誘導(dǎo)地限制，保證了穩(wěn)定發(fā)育，解決了甜瓜利用雌核誘導(dǎo)單倍體效率低的問(wèn)題，適用于國(guó)內(nèi)的甜瓜品種。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種創(chuàng)制甜瓜雙單倍體的方法，特別是一種遠(yuǎn)緣雜交誘導(dǎo)胚發(fā)育直接創(chuàng)制甜瓜雙單倍體的方法。

背景技術(shù)

甜瓜是葫蘆科甜瓜屬一年生蔓性草本植物。傳統(tǒng)育種手段經(jīng)過(guò)幾代自交獲得的自交系，可能仍然不是100％純合的。所以僅利用傳統(tǒng)的育種手段難以滿足現(xiàn)代遺傳育種研究。雙單倍體技術(shù)應(yīng)用于育種不僅可以縮短育種年限，而且還在遺傳理論研究上有獨(dú)特的作用。

在葫蘆科作物上，雙單倍體通過(guò)未受精離體子房培養(yǎng)、離體胚珠培養(yǎng)、輻射花粉誘導(dǎo)結(jié)合胚拯救、花藥培養(yǎng)獲得單倍體，然后再通過(guò)染色體加倍獲得。到目前為止，用輻射花粉授粉是甜瓜作物中最有效的單倍體誘導(dǎo)方法。通過(guò)遠(yuǎn)緣雜交創(chuàng)制單倍體在葫蘆科作物中僅見(jiàn)幾篇文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。Hayase從筍瓜(CucurbitamaximaL.)×中國(guó)南瓜(CucurbitamoschataL.)的種瓜中得到了單倍體植株。DumasdeVaulx用相同的方法(父本為Cucumis ficifolius A.Rich.)給甜瓜(CucumismeloL.)授粉得到了甜瓜的單倍體植株。Nikolova等用二倍體的黃瓜株系給1個(gè)黃瓜DH(雙單倍體)株系授粉，從其后代中篩選出了5棵單倍體植株。Kurtar等曾用西瓜、甜瓜、黃瓜、南瓜、絲瓜、瓠瓜和黑籽南瓜分別給4種不同基因型的南瓜(CucurbitapepoL.)授粉試圖誘導(dǎo)單倍體，結(jié)果在一個(gè)授粉組合中獲得二倍體胚和植株。由此可見(jiàn)，現(xiàn)有技術(shù)利用此方法獲得單倍體極大受到父、母本基因型的限制，形成單倍體不夠穩(wěn)定，且單倍體胚在發(fā)育階段未能穩(wěn)定地加倍形成DH(雙單倍體)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)缺陷，本發(fā)明的任務(wù)在于提供一種遠(yuǎn)緣雜交誘導(dǎo)胚發(fā)育直接創(chuàng)制甜瓜雙單倍體的方法，解決甜瓜利用雌核誘導(dǎo)單倍體效率低的問(wèn)題以及利用輻射花粉結(jié)合胚拯救誘導(dǎo)單倍體成本高、染色體加倍困難的問(wèn)題。

本發(fā)明技術(shù)方案如下：一種遠(yuǎn)緣雜交誘導(dǎo)胚發(fā)育直接創(chuàng)制甜瓜雙單倍體的方法，包括以下步驟：

步驟1、取黃瓜雄花與甜瓜雌花進(jìn)行授粉，授粉后對(duì)雌花進(jìn)行套袋隔離，同時(shí)在果柄處噴施氯吡脲水溶液；

步驟2、授粉后的4～5h，在子房基部噴施噻苯隆溶液；

步驟3、收獲種瓜后取相對(duì)飽滿種子在培養(yǎng)基中進(jìn)行胚拯救獲得再生植株；

步驟4、對(duì)再生植株進(jìn)行煉苗、移栽，隨后正常管理。

進(jìn)一步地，所述氯吡脲水溶液濃度為20～25mg/L。

進(jìn)一步地，所述噻苯隆溶液濃度為5～10mg/L。

進(jìn)一步地，所述步驟1授粉時(shí)，所述黃瓜雄花為清晨開(kāi)放的黃瓜雄花，所述甜瓜雌花為前一日去雄套袋隔離，當(dāng)日開(kāi)花的甜瓜雌花。

進(jìn)一步地，所述步驟3進(jìn)行胚拯救時(shí)培養(yǎng)基為MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

進(jìn)一步地，所述步驟4為當(dāng)再生植株長(zhǎng)至三葉一心期時(shí)開(kāi)始煉苗，置于常溫下生長(zhǎng)2～3d天后移栽至裝有育苗基質(zhì)的育苗缽。

進(jìn)一步地，所述育苗基質(zhì)為草炭與珍珠巖等體積混合。

進(jìn)一步地，所述步驟4移栽至育苗缽，遮陰3d天轉(zhuǎn)為正常管理。

進(jìn)一步地，所述甜瓜品種為“滿田紅”。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點(diǎn)在于：