[發(fā)明專利]一種多因子細胞因子自動分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110479610.4
• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113188981B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王志崗;賀環(huán)宇;郭琰
• 申請（專利權(quán)）人: 天津深析智能科技發(fā)展有限公司
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14;G01N21/64
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 杜文茹

一種多因子細胞因子自動分析方法：提取FCS格式或LMD格式文件中的流式細胞數(shù)據(jù)；對所有細胞的FSC?H去除細胞碎片；將有效細胞分為若干個細胞群，將若干個細胞群重新分為兩個細胞群；將兩個細胞群分為與所檢測細胞因子個數(shù)相同的若干個細胞群；對每個細胞群內(nèi)所有細胞抗體APC的熒光強度進行核密度概率密度函數(shù)曲線的峰個數(shù)檢測；對細胞群繼續(xù)進行分群；將細胞點數(shù)少于60的細胞群與周圍距離最近的細胞群進行合并；將每個細胞群與所檢測的細胞因子進行對應(yīng)；對每個細胞群內(nèi)所有細胞的PE抗體的熒光強度進行離群點檢測，并去除離群點；計算每個細胞因子的細胞群PE抗體的平均熒光強度。本發(fā)明能夠有效去除噪音干擾和強度波動獲取細胞群的準確熒光強度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種細胞因子分析方法。特別是涉及一種多因子細胞因子自動分析方法。

背景技術(shù)

細胞因子是一種在機體內(nèi)十分微量，主要是通過相應(yīng)的細胞受體起作用的，一般分子量低于10kd，多數(shù)分布在3kd左右的多肽，通過血液或淋巴液進行傳遞，通過自分泌、內(nèi)分泌或旁分泌進行細胞之間的通訊和信號交流。細胞因子在免疫調(diào)節(jié)、炎癥應(yīng)答、腫瘤轉(zhuǎn)移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎(chǔ)免疫研究的有效手段，同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監(jiān)測方面具有重要價值。

細胞因子流式分析法是用抗細胞因子抗體與細胞表面或胞內(nèi)特定亞群標志組合，即可檢測不同細胞亞群細胞因子的分泌，同時采用特殊的化學與抗體選擇，確保靜止與無細胞因子分泌細胞的最小熒光背景。目前多因子細胞因子的分析需要通過在2維散點圖上面將不同標記的微球群區(qū)分開來,傳統(tǒng)方法通過固定范圍或者人工手動圈群的方法實現(xiàn)。

傳統(tǒng)的細胞因子流式分析法存在的以下問題：

1、每個數(shù)據(jù)內(nèi)二維散點圖的分布不盡相同，所以按照固定范圍圈選細胞會在一定程度上影響細胞分類的效果；

2、人工圈選則會因為操作人員的主管因素影響細胞分類結(jié)果，同時也會需要人工成本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種可以在節(jié)約人力成本的同時節(jié)約時間成本，能夠自動獲取細胞群的準確熒光強度的多因子細胞因子自動分析方法。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種多因子細胞因子自動分析方法，包括如下步驟：

1)提取FCS格式或LMD格式文件中的流式細胞數(shù)據(jù)；流式細胞數(shù)據(jù)包含：每個流式細胞前向角散射光FSC數(shù)據(jù)、側(cè)向散射光SSC數(shù)據(jù)及若干抗體對應(yīng)的熒光強度值；

2)對所有細胞的FSC-H采用核密度估計方法，去除細胞碎片；

3)對去除細胞碎片后流式細胞的FSC-H、SSC-H及抗體APC的熒光強度值，采用聚類的方法，將有效細胞分為若干個細胞群，將各個細胞群FSC-H的平均值與分群閾值進行比較，將若干個細胞群重新分為兩個細胞群；

4)分別對兩個細胞群內(nèi)所有細胞抗體APC的熒光強度采用高斯混合模型的聚類算法，將兩個細胞群分為與所檢測細胞因子個數(shù)相同的若干個細胞群；

5)利用核密度概率密度函數(shù)計算公式對每個細胞群內(nèi)所有細胞抗體APC的熒光強度進行計算核密度概率密度函數(shù)，對核密度概率密度函數(shù)曲線的峰個數(shù)進行檢測，如果峰的個數(shù)大于1，則進入步驟6)，否則進入步驟7)；

6)對細胞群FSC-H采用核密度概率密度函數(shù)計算公式計算核密度概率密度函數(shù)，并根據(jù)核密度概率密度函數(shù)的波峰和波谷對細胞群繼續(xù)進行分群；

7)檢測所有細胞群內(nèi)細胞點數(shù)，將細胞點數(shù)少于60的細胞群與周圍距離最近的細胞群進行合并；

8)根據(jù)每個細胞群抗體APC的平均熒光強度，將每個細胞群與所檢測的細胞因子進行對應(yīng)；

9)采用高斯混合模型對每個細胞群內(nèi)所有細胞的PE抗體的熒光強度進行離群點檢測，并去除離群點；