[發明專利]一種無肌間刺鯽品系培育方法

在審

• 申請號: 202110478410.7
• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113151361A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 匡友誼;鄭先虎;佟廣香;孫志鵬;曹頂臣;閆婷;徐歡;董樂;楊笑星;劉天奇;張潭;張婷婷;孫效文
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黑龍江水產研究所
• 主分類號: C12N15/89
• 分類號: C12N15/89;C12N15/873;A01K67/027
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務所(普通合伙) 23210
• 代理人: 何強

一種無肌間刺鯽品系培育方法，它涉及一種水產養殖品種培育方法。為對鯽肌間刺進行遺傳改良，本發明提出了一種通過基因敲除bmp6基因培育少或無肌間刺鯽的方法。培育方法：針對bmp6基因在鯽基因組中的2個拷貝bmp6a和bmp6b分別設計敲除靶位點，然后通過2輪基因敲除和篩選，獲得F2代bmp6a和bmp6b雙基因突變純合系，然后利用F2代bmp6a和bmp6b雙基因突變純合系進行擴繁形成無肌間刺鯽新品系。本發明方法獲得肌間刺數量在20枚以下和無肌間刺的鯽品種。

技術領域

本發明涉及一種水產養殖品種培育方法。

背景技術

鯉科魚類是我國的主要養殖魚類，年產量約2000多萬噸，為我國老百姓提供了近1/3的優質動物蛋白。但因為鯉科魚類含有的肌間刺多，造成了人們在食用過程中的不便，甚至可能導致卡噪子等身體上的傷害，同時魚肉產品的加工(如魚丸等)也受到阻礙，因此鯉科魚類肌間刺的遺傳改良成為我國水產遺傳育種的重要目標之一。目前有一些關于肌間刺選育的報道，如徐曉鋒等(2015)在草魚雌核發育的群體中發現一尾生長正常且肌間刺缺失的突變體，但并未獲得無或少肌間刺草魚突變群體的報道；巴西科學家(2017)采用X射線在大蓋巨脂鯉中篩選到一個肌間刺缺失的群體，但在后期育種中也未獲得少或無肌間刺的群體(Stokstad,2020)。Guo等(2018)通過三角魴(Megalobrama terminalis)與翹嘴鲌(Culter alburnus)的雜交實驗表明，三角魴♀×翹嘴鲌♂雜交子代的肌間刺數量(127)小于父本(137)，大于母本(124)，但顯著性小于團頭魴♀×翹嘴鲌♂的雜交子代肌間刺數量(133)，說明可以通過雜交育種的方法獲得少肌間刺數量的品種，并申請了發明專利(公布號CN107347747A)。黎玲等(2013)報道通過人工培育的雜交鯽比野生鯽肌間刺數量少，可通過人工培育和雜交育種方法減少鯽肌間刺數量。鮑寶龍等通過敲除MSTN基因，發明了使肌間刺變粗的方法(發明專利公布號CN111560401A，CN111549030A，CN111549031A，CN111500581A)。高澤霞等通過敲除斑馬魚scxa基因，獲得了肌間刺數量減少70％以上的突變體，但也造成了肋骨等其它骨骼發育不良(發明專利申請號：201911104496.6；Nie etal.,2020；Kague et al.,2019)，同時也未有在其它鯉科魚類中進行應用的報道。綜上，雖然有一些方法可以減少鯉科魚類肌間刺的數量，但目前仍未有無肌間刺鯉科魚類新品種/系出現。

鯽是我國的主要養殖品種之一，年產量約300萬噸，其肉質鮮美，深受老百姓喜愛。同時也由于肌間刺(不同品種鯽肌間刺數量平均約71～84)的原因使其品質受到了影響，因此肌間刺也是其遺傳育種的重要目標。雖然有報道稱可以通過雜交育種和人工選育減少鯽肌間刺數量，但并未有肌間刺數量減少50％以上的品系或品種出現。

發明內容

為對鯽肌間刺進行遺傳改良，本發明提出了一種通過基因敲除bmp6基因培育少或無肌間刺鯽的方法。

本發明無肌間刺鯽品系培育方法按以下步驟進行無肌間刺鯽品系培育：

針對bmp6基因在鯽基因組中的2個拷貝bmp6a和bmp6b分別設計敲除靶位點，然后通過2輪基因敲除和篩選，獲得F2代bmp6a和bmp6b雙基因突變純合系，然后利用F2代bmp6a和bmp6b雙基因突變純合系進行擴繁形成無肌間刺鯽新品系；

其中，用bmp6a或bmp6b或bmp6a和bmp6b上對應的sgRNA與Cas9蛋白混合后顯微注射鯽單細胞期胚胎，進行第一輪基因敲除，構建F0代群體，然后F0代群體養殖3～5個月進行PIT標記和DNA提取，再進行測序確定鯽個體體細胞突變的等位基因及突變率，選取體細胞突變系且體細胞突變率為95％以上的F0代個體作為親本制備0代受精卵；