[發明專利]一種魚用疫苗聯合免疫接種方法

在審

• 申請號: 202110476234.3
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113304255A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 王啟要;劉曉紅;徐榮靜;馬悅;張琛;曲江波;王田田
• 申請（專利權）人: 煙臺開發區天源水產有限公司;華東理工大學
• 主分類號: A61K39/116
• 分類號: A61K39/116;A61K39/02;A61P31/04;A61P37/04
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 馬國冉

本發明提供了一種魚用疫苗聯合免疫接種方法；第一種方式：采用遲純愛德華氏菌減毒候選疫苗株WED株和大菱鲆鰻弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株的抗原濃度以1:10進行疫苗配制注射接種大菱鲆；第二種方式：選取幼苗期大菱鲆進行浸泡接種遲純愛德華氏菌減毒候選疫苗株WED株，長至幼魚期時采取注射接種大菱鲆鰻弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株。本發明以冷水性鲆鰈類養殖品種為免疫靶動物，探索了上述兩種疫苗的聯合接種策略，通過評價該策略對實際生產中鲆鰈類的飼料轉化率、死淘率等關鍵生產性能的影響，確定聯合接種策略的可行性和有效性，最終建立起以聯合免疫接種為核心的新型鲆鰈類健康養殖生產體系，實現對多病原混合感染的聯防聯控效果。

技術領域

本發明涉及魚用疫苗領域；尤其涉及一種魚用疫苗聯合免疫接種方法。

背景技術

由于水生養殖環境復雜，養殖過程中普遍存在多種病原混合感染風險。目前，我國已獲批新獸藥注冊證的魚用疫苗僅7種：草魚出血病滅活疫苗、草魚出血病活疫苗(GCHV-892株)、嗜水氣單胞菌敗血癥滅活疫苗、牙鲆魚溶藻弧菌、鰻弧菌、遲緩愛德華氏菌多聯抗獨特型抗體疫苗、大菱鲆遲純愛德華氏菌活疫苗(EIBAV1 株)、大菱鲆鰻弧菌基因工程活疫苗(MVAV6203株)、鱖傳染性脾腎壞死病滅活疫苗(NH0618株)，上述疫苗基本為針對單一病原的單效價疫苗產品，故用于預防多病原混合感染導致的養殖病害存在嚴重局限性。

針對多病原混合感染，從技術上可采取兩種免疫防控策略：1)一種疫苗自身表達含有兩種及以上抗原，形成多效價免疫能力；2)兩種以上單一效價疫苗混合配制形成聯合疫苗產品，或采用優化的聯合接種方式進行多種疫苗接種。第一策略多以一種疫苗株(或載體菌株)為主體出發株，通過基因重組技術構建形成可表達兩種及以上外源抗原的重組疫苗株，從而具備針對兩種以上病原的多價免疫應答效力。這種產品形式是目前國內外的一個熱點研究開發領域，但由于屬于遺傳改造生物(genetically modified organisms,GMO)，存在天然的潛在轉基因生物安全問題，因此，在世界范圍內各國的行政許可監管程序更加苛刻，極大增加了疫苗產品的研發周期，在國內外水產疫苗領域鮮有該類產品商業化。同時，該類產品形式無法精準控制各抗原的含量與占比，存在針對某一病原的免疫劑量不足或過量的缺陷，可導致多價免疫效力無法達到預期或過劑量接種安全隱患。

鑒于上述病害防控需求和不同疫苗免疫策略技術特點，開發兼具效力和安全性的聯合免疫策略成為目前國內外水產疫苗商業化的主要技術形式。

大菱鲆(又名多寶魚)是我國北方重要的海水經濟養殖魚種，2019年養殖量達約8萬噸，但近年來病害頻發導致的經濟損失制約了大菱鲆養殖產業的健康可持續發展。

遲純愛德華氏菌和鰻弧菌是大菱鲆養殖過程中的兩大重要細菌性病原，前者可引起腹水病，后者可引起出血性敗血癥。針對上述兩種病原，華東理工大學開發了遲純愛德華氏菌減毒候選疫苗株WED株和大菱鲆鰻弧菌基因工程活疫苗 MVAV6203株，并均獲批農業轉基因生物安全證書(證書號：農基安(2013)第 267號和農基安(2011)第065號)。兩種疫苗單獨注射接種大菱鲆可有效激發魚體免疫應答，并獲得良好免疫保護效果，相對免疫保護力(RPS)均超過70％。但是兩種疫苗能否聯合應用、聯合應用時是否存在抗原競爭、以何種接種策略聯合應用可確保接種安全并使疫苗發揮最佳免疫效力，對養殖生產中多病害混合發生起到聯防作用未知。

Bao等考察了遲純愛德華氏菌減毒候選疫苗株WED株與大菱鲆鰻弧菌基因工程活疫苗MVAV6203同時注射接種大菱鲆的免疫效力。實驗中兩種疫苗以等體積混合后注射接種大菱鲆，抗原含量均為1×10⁶CFU/尾。結果表明，兩種疫苗同時接種較單獨接種時對愛德華氏菌的相對免疫保護力維持不變(RPS均為70％)，對鰻弧菌的相對免疫保護力由77.7％提高至83.3％。但是該研究未對聯合接種實施中兩種抗原的含量、配比、接種順序等進行考察。