[發明專利]IL23A和/或IL12B基因人源化非人動物的構建方法及應用

有效

• 申請號: 202110475905.4
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113355355B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 沈月雷;黃蕤;白陽;郭朝設;張美玲;周小飛
• 申請（專利權）人: 百奧賽圖（北京）醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/24;C12N15/62;A01K67/027
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 劉玉玲;徐丹丹

1.一種IL23A基因人源化非人動物的構建方法，其特征在于，所述的非人動物的基因組中包含嵌合IL23A基因，所述的嵌合IL23A基因包含人IL23A基因的部分，所述的構建方法包括用包含人IL23A基因的部分替換至非人動物IL23A基因座，所述的人IL23A基因的部分編碼SEQ?ID?NO：4所示蛋白，所述的人IL23A基因的部分為從人IL23A基因的ATG編碼序列開始至TAA終止的且包含1-2號內含子、2-3號內含子和3-4號內含子的核苷酸序列，所述的非人動物體內表達人IL23A蛋白，所述的非人動物體內的內源IL23A蛋白表達降低或缺失，所述的非人動物為小鼠。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述的人IL23A基因的部分核苷酸序列為SEQ?ID?NO：7所示的核苷酸序列。

3.根據權利要求1-2任一所述的構建方法，其特征在于，所述非人動物使用靶向載體進行構建，所述的靶向載體包含供體DNA序列，所述的供體DNA序列為從人IL23A基因的ATG編碼序列開始至TAA終止的核苷酸序列；所述的靶向載體還包含5’臂，所述5’臂核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示；所述的靶向載體還包含3’臂，所述3’臂核苷酸序列如SEQ?ID?NO：6所示。

4.根據權利要求3所述的構建方法，其特征在于，所述的供體DNA序列如SEQ?ID?NO：7所示。

5.一種IL12B基因人源化非人動物的構建方法，其特征在于，所述的非人動物的基因組中包含嵌合IL12B基因，所述的嵌合IL12B基因包含人IL12B基因的部分，所述的構建方法包括將人IL12B基因的部分替換至非人動物IL12B基因座，所述的人IL12B基因的部分通過內源調控元件進行調控，所述的人IL12B基因的部分編碼SEQ?ID?NO：32所示蛋白，所述的人IL12B基因的部分為人IL12B基因的2號外顯子至8號外顯子的全部基因組序列，所述的非人動物體內表達人IL12B蛋白，所述的非人動物內源IL12B蛋白表達降低或缺失，所述的非人動物為小鼠。

6.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于，所述的人IL12B基因的部分核苷酸序列為SEQ?ID?NO：35所示的核苷酸序列。

7.根據權利要求5或6所述的構建方法，其特征在于，所述的非人動物使用靶向載體進行構建，所述的靶向載體包含供體DNA序列，所述的供體DNA序列為人IL12B基因的2號外顯子至8號外顯子的全部；所述的靶向載體還包含5’臂，所述5’臂核苷酸序列如SEQ?ID?NO：33所示；所述的靶向載體還包含3’臂，所述3’臂核苷酸序列如SEQ?ID?NO：34所示。

8.根據權利要求7所述的構建方法，其特征在于，所述的供體DNA序列為SEQ?ID?NO：35所示的序列。

9.一種IL23A基因和IL12B基因人源化非人動物的構建方法，其特征在于，權利要求1-4任一所述的構建方法構建的IL23A基因人源化非人動物與權利要求5-8任一所述的構建方法構建的IL12B基因人源化非人動物進行交配、體外授精或直接進行基因編輯，并進行篩選，得到IL23A基因和IL12B基因人源化非人動物。

10.一種IL23A基因的靶向載體，其特征在于，所述的靶向載體包含供體DNA序列，所述的供體DNA序列為從人IL23A基因的ATG編碼序列開始至TAA終止的核苷酸序列；所述的靶向載體還包含5’臂，所述5’臂核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示；所述的靶向載體還包含3’臂，所述3’臂核苷酸序列如SEQ?ID?NO：6所示。

11.根據權利要求10所述的靶向載體，其特征在于，所述的供體DNA序列為SEQ?ID?NO：7所示的序列。