[發(fā)明專利]一種棗根尖染色體壓片的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110475150.8
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113188876B
• 公開（公告）日: 2022-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 石倩倩;蔣俊珺;李新崗;李希
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N1/34
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11562
• 代理人: 張雪

本發(fā)明公開一種棗根尖染色體壓片的制備方法，涉及細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域；本發(fā)明提供了一種不同于傳統(tǒng)制片技術(shù)的新型棗染色體壓片制片技術(shù)，為本領(lǐng)域染色體壓片的制備提供了新的思路；采用本發(fā)明提供的棗染色體壓片的制備方法，可以批量制得形態(tài)較清晰的染色體制片，染色體的離散程度較大，能更清晰觀測細(xì)胞內(nèi)染色體的長度、著絲粒位置、臂比、隨體大小等特征，通過核型分析確定染色體倍性，可對倍性育種、人工誘導(dǎo)、種質(zhì)資源分類鑒定等提供關(guān)鍵技術(shù)；本發(fā)明棗染色體壓片的制備方法還具有成本低廉，簡單方便的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種棗根尖染色體壓片的制備方法。

背景技術(shù)

棗(Ziziphus jujuba Mill.)原產(chǎn)中國，屬鼠李科棗屬落葉經(jīng)濟(jì)林果樹，主要分布于山東、河南、河北、陜西、山西等省份，現(xiàn)廣泛栽植于亞洲、歐洲和美洲。紅棗以其豐富的藥理活性而聞名于世，經(jīng)過數(shù)千年自然和人工選擇、馴化和進(jìn)化過程，已經(jīng)培育出許多地方品種和優(yōu)良品種。在棗種質(zhì)資源分類、外源染色體的鑒定、基因的染色體定位和親緣關(guān)系鑒定等研究中，都涉及到染色體的研究。

染色體是生物體內(nèi)在的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)，是遺傳物質(zhì)的主要載體。染色體核型分析是細(xì)胞分類學(xué)的重要指標(biāo)，對于研究植物的起源和進(jìn)化、物種之間的親緣關(guān)系以及種間雜種鑒定等都很有價值。植物染色體制片是進(jìn)行核型分析、帶型分析和染色體原位雜交等細(xì)胞遺傳學(xué)研究的基礎(chǔ)。近年來隨著細(xì)胞遺傳學(xué)研究在植物分類和育種中的應(yīng)用，染色體制片技術(shù)尤為重要。分析植物染色體大小、數(shù)量、形態(tài)特征、核不對稱系數(shù)，在一定范圍能反映植物演化和種間親緣關(guān)系，可為雜交育種和新品種選育提供細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。因此，若能找到棗染色體制片的最佳技術(shù)方法，有利于對棗染色體進(jìn)行深入研究，對棗的起源進(jìn)化、品種分類、不同倍性品種雜交后代的倍性鑒定等研究也具有十分重要的理論和實踐意義。

目前本領(lǐng)域?qū)Ω饧?xì)胞染色體觀察常采用傳統(tǒng)實驗方法，但傳統(tǒng)方法具有步驟繁瑣、耗時長、效果不明顯等缺點，因此，提供一種簡單快速且結(jié)果精確的棗染色體鑒定技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種棗根尖染色體壓片的制備方法，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種棗根尖染色體壓片的制備方法，所述制備方法具體為：

(1)棗苗的根部置于質(zhì)量濃度10％-50％鋁離子溶液中，培養(yǎng)1.5-4h，培養(yǎng)結(jié)束后將根部洗凈；

(2)將步驟(1)中洗凈的棗苗的根部置于質(zhì)量濃度10％-50％鈣離子溶液中，培養(yǎng)2-4h，培養(yǎng)結(jié)束后截取根尖段，洗凈；

(3)將步驟(2)洗凈的根尖段投入固定液中固定，得到固定材料；

(4)將步驟(3)獲得的固定材料染色，獲得棗根尖染色體壓片。

進(jìn)一步的，步驟(1)所述鋁離子溶液中還包含0.3％-0.5％碳納米材料。

進(jìn)一步的，所述碳納米材料為碳納米管或石墨烯量子點。

進(jìn)一步的，步驟(3)中所述根尖段投入固定液中固定時的條件為0℃；

進(jìn)一步的，步驟(4)中所述固定材料染色的染色劑為改良石炭酸品紅染色液。

本發(fā)明還提供一種制備棗根尖染色體壓片的試劑盒，所述試劑盒包括：鋁離子溶液、鈣離子溶液、固定液和染色液；制備棗根尖染色體壓片的方法具體為：

(1)棗苗的根部置于質(zhì)量濃度10％-50％鋁離子溶液中，培養(yǎng)1.5-4h，培養(yǎng)結(jié)束后將根部洗凈；

(2)將步驟(1)中洗凈的棗苗的根部置于質(zhì)量濃度10％-50％鈣離子溶液中，培養(yǎng)2-4h，培養(yǎng)結(jié)束后截取根尖段，洗凈；

(3)將步驟(2)洗凈的根尖段投入固定液中固定，得到固定材料；