[發明專利]一種果桑品種‘粵椹74’的SSR分子標記及其核心引物組、試劑盒和應用

有效

• 申請號: 202110473626.4
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN112980999B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 王振江;唐翠明;羅國慶;戴凡煒;鐘建武;林森;陳蓮;李智毅
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院蠶業與農產品加工研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 胡素麗;劉明星

1.一種用于鑒定果桑品種‘粵椹74’的SSR分子標記，其特征在于，包括SSR分子標記M792和/或M20197；所述的SSR分子標記M792的重復基序為(AGC)_n，其中n≥6，其右側序列如SEQ ID NO.6所示，其左側序列如SEQ ID NO.5所示；所述的SSR分子標記M20197的重復基序為(TA)_n，其中n≥6，其右側序列如SEQ ID NO.8所示，其左側序列如SEQ ID NO.7所示。

2.一種用于鑒定果桑品種‘粵椹74’的SSR分子標記的核心引物組，其特征在于，包括針對SSR分子標記M792的引物和/或針對SSR分子標記M20197的引物：

所述的針對SSR分子標記M792的引物：

M792-F：5’-TACAATCCTCCACCTGACAAACT-3’；

M792-R：5’-GTGGGGACGGAGACTACTACTG-3’；

所述的引物M792-F的5’端標記有熒光報告基團；

所述的針對SSR分子標記M20197的引物：

M20197-F：5’- TCATTTTGGCTTATCTCTCTTGC-3’；

M20197-R：5’- TTTGTGTGCTTCTTCTGTAACCA -3’；

所述的引物M20197-F的5’端標記有熒光報告基團。

3.根據權利要求2所述的用于鑒定果桑品種‘粵椹74’的SSR分子標記的核心引物組，其特征在于，所述的熒光報告基團為FAM、HEX、TAMRA或ROX。

4.一種用于鑒定果桑品種‘粵椹74’的快速檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求2或3所述的SSR分子標記的核心引物組。

5.一種利用SSR分子標記鑒定果桑品種‘粵椹74’的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）提取待測果桑樣品的基因組DNA；

（2）以步驟（1）提取的基因組DNA為模板，分別利用權利要求2或3所述的引物對M792-F/M792-R和M20197-F/ M20197-R進行PCR擴增；

（3）對步驟（2）中的PCR擴增產物進行分型，對分型結果進行條帶判別；若以引物對M792-F/M792-R為引物擴增得到的PCR擴增產物只有99 bp和111 bp兩條特異性條帶，以引物對M20197-F/M20197-R為引物擴增得到的PCR擴增產物只有119 bp和125 bp兩條特異性條帶，則表明待測果桑樣品為‘粵椹74’，否則，則表明待測果桑樣品為非‘粵椹74’。

6.根據權利要求5所述的利用SSR分子標記鑒定果桑品種‘粵椹74’的方法，其特征在于，步驟（2）所述的PCR擴增，其反應體系為20 μL，包括：50 ng/μL DNA模板0.5 μL、10×PCRbuffer 2 μL、25 mM MgCl₂ 2 μL、10 mM dNTPs 0.5 μL、5 U/μL Taq DNA聚合酶0.2 μL、10μM上游引物0.5 μL、10 μM下游引物0.5 μL和ddH₂O 13.8 μL；步驟（2）所述的PCR擴增，其反應程序為：95℃預變性5 min；95℃變性30 s，60℃退火30 s，每個循環降1℃，72℃延伸30s，循環10次；94℃變性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸30 s，循環30次；最后72℃延伸5 min。

7.權利要求1所述的SSR分子標記的檢測試劑在鑒定果桑品種‘粵椹74’中的應用。

8.權利要求2或3所述的核心引物組或權利要求4所述的快速檢測試劑盒在鑒定果桑品種‘粵椹74’中的應用。