[發明專利]牛支原體Mbov_0701突變基因及其突變株和應用

有效

• 申請號: 202110467490.6
• 申請日: 2021-04-28
• 公開（公告）號: CN113512559B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 郭愛珍;郝智瑜;李茜茜;朱習芳;趙剛;張慧;陳穎鈺;胡長敏;陳曦;陳建國
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/22;C12N1/21;C12Q1/689;C12Q1/04;A61K35/74;A61P31/04;C12R1/35
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 王燦

本發明涉及動物傳染病防治技術領域。本發明提供了牛支原體Mbov_0701突變基因及其突變株和應用。所述基因突變株在Mbov_0701基因的701核苷酸位點后出現插入突變，在與牛胚胎肺細胞共培養時，表現出顯著生長缺陷表型，在PPLO固體培養基上表現為小菌落形態。Mbov_0701基因編碼蛋白是一種核酸外切酶MbovP701，本申請的基因突變株可應用于牛支原體代謝生理、致病和防治藥物制備等領域。

技術領域

本發明涉及動物傳染病防治技術領域，尤其涉及牛支原體Mbov_0701突變基因及其突變株和應用。

背景技術

牛支原體(Mycoplasma bovis,M.bovis)屬于支原體科支原體屬成員，是肉牛和奶牛的重要病原體，可致肺炎、關節炎、乳腺炎、角膜結膜炎、耳炎、生殖道炎癥、流產與不孕等等多種疾病。

盡管自牛支原體發現至今已有60年，但目前尚缺乏特異性防控手段用于牛支原體病的防治，而創制特異性防控措施需要特異性分子靶標。確定牛支原體的毒力相關因子是發現牛支原體特異性靶標的前提。本申請人通過基因克隆表達鑒定MbovP701蛋白在Mg²⁺存在條件下具有降解外源雙鏈DNA的核酸外切酶功能，且為非經典的分泌蛋白，可以分泌至胞體外發揮核酸外切酶的作用，因此是牛支原體防治藥物研發的潛在分子靶標。在此基礎上，證實其基因缺失突變株在與牛胚胎肺細胞(EBL)共培養時，表現出顯著的生長缺陷表型，表明該基因是牛支原體與宿主細胞共生長時所必需的基因，可能通過降解外源核酸為牛支原體提供核苷酸營養。鑒于該蛋白對牛支原體的生長的影響，其突變株可望在牛支原體致病、生理代謝和防治藥物等領域具有潛在的應用前景。

發明內容

本發明的目的在于提供牛支原體Mbov_0701突變基因及其突變株和應用，Mbov_0701基因的編碼蛋白MbovP701為類YqaJ蛋白，具有核酸外切酶活性。與野生菌株比較，突變菌株與牛胚胎肺細胞共培養時，呈現出顯著的生長缺陷，在PPLO固體培養基上呈現小菌落表型。基于牛支原體與細胞共培養下的存活能力與毒力相關，該突變株可望在牛支原體致病、生理代謝和藥物防治等領域有潛在應用前景。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了牛支原體Mbov_0701突變基因，所述突變基因的核苷酸序列如SEQID NO：1所示，所述突變基因的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本發明還提供了所述突變基因作為牛支原體生長缺陷標志物的應用。

本發明還提供了一株牛支原體Mbov_0701基因突變株，所述基因突變株保藏名稱為牛支原體T5.808，保藏單位：中國典型培養物保藏中心，保藏編號：CCTCC NO：M 2020541。

本發明還提供了所述牛支原體Mbov_0701基因突變株在制備牛支原體防治藥物中的應用。

本發明提供了牛支原體Mbov_0701突變基因及其突變株和應用。所述基因突變株在Mbov_0701基因的701核苷酸位點后出現插入突變，在與牛胚胎肺細胞共培養時，表現出顯著生長缺陷表型，在PPLO固體培養基上表現為小菌落形態。Mbov_0701基因編碼蛋白是一種核酸外切酶MbovP701，本申請的基因突變株可應用于牛支原體代謝生理、致病和防治藥物制備等領域。

附圖說明

圖1為牛支原體生長缺陷菌株T5.808定量檢測分析圖；

圖2為Mbov_0701基因序列中轉座子插入突變位點；

圖3牛支原體與EBL細胞共培養生長曲線分析圖；

圖4牛支原體在PPLO培養基中生長曲線分析圖；

圖5牛支原體野生株HB0801和突變株T5.808的菌落形態圖；