[發(fā)明專利]一種雄性不育基因MsGAL及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110465414.1
• 申請日: 2021-04-28
• 公開（公告）號: CN113046377B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐博;王英哲;閆冬;孟悅;徐安凱;張南翼
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N9/38;C12N15/84;C12N15/66;A01H5/02;A01H6/54
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 王丹陽

1.一種雄性不育基因MsGAL，其特征在于，所述基因MsGAL核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種雄性不育MsGAL基因的應(yīng)用，其特征在于，所述的應(yīng)用是：通過抑制MsGAL基因的表達從而獲得紫花苜蓿雄性不育株系，并用所述紫花苜蓿雄性不育株系來生產(chǎn)種子。

3.一種恢復(fù)MsGAL紫花苜蓿雄性不育的方法，其特征在于，通過構(gòu)建過表達載體，利用遺傳轉(zhuǎn)化手段轉(zhuǎn)化權(quán)利要求2中的紫花苜蓿雄性不育株系，能夠使其恢復(fù)育性及野生型表型。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種恢復(fù)MsGAL紫花苜蓿雄性不育的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

將MsGAL互補構(gòu)建的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入所述紫花苜蓿雄性不育系，培育，即得；其中MsGAL互補構(gòu)建載體中含有編碼如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種恢復(fù)MsGAL紫花苜蓿雄性不育的方法，具體包括以下步驟：

(a)提供攜帶表達MsGAL互補構(gòu)建載體的農(nóng)桿菌LBA4404；

在MsGAL基因全長兩端添加XbaI和SacI酶切位點，設(shè)計特異性引物MsGAL-F-pBI/MsGAL-G-pBI，用高保真酶進行PCR擴增；

MsGAL-F-pBI：5’-cgagctctccacacttcacttggattgca-3’和

MsGAL-R-pBI：5’-gctctagaatggaattacttaaattaattaatatgtctttaactct-3’

對pBI-121表達載體使用同樣的雙酶進行37℃酶切3h后，將目的片段與去除GUS后的線性長載體相連接，轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞于LB/Kan固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取單克隆用載體引物M13-F/R進行PCR檢測并測序；

M13-F：5’-cgccagggttttcccagtcacgac-3’和

M13-R：5’-cacacaggaaacagctatgac-3’

將菌液在LB/Kan液體培養(yǎng)液中擴繁，測序正確后，成功構(gòu)建pBI121-MsGAL過表達載體，將所得pBI121-MsGAL過表達載體倒入農(nóng)桿菌；

(b)將紫花苜蓿不育系細(xì)胞或組織與步驟(a)中農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞接觸，從而使編碼如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列轉(zhuǎn)入到紫花苜蓿不育系細(xì)胞，并且整合到紫花苜蓿不育系細(xì)胞的染色體上；

(c)選擇轉(zhuǎn)入所述核苷酸的紫花苜蓿細(xì)胞或組織，再生，獲得紫花苜蓿植株。