[發明專利]一種鎳螯合磁性納米顆粒、制備方法及用于分離純化組氨酸標簽蛋白的用途

有效

• 申請號: 202110462648.0
• 申請日: 2021-04-28
• 公開（公告）號: CN113171755B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 劉姿;陳玉茹;馬亮;劉祥;陳學明;顏庭軒;葛阿雪
• 申請（專利權）人: 安徽工業大學
• 主分類號: B01J20/22
• 分類號: B01J20/22;B01J20/28;B01J20/30;C07K1/22
• 代理公司: 長沙新裕知識產權代理有限公司 43210
• 代理人: 趙超

1.一種鎳螯合磁性納米顆粒用于分離純化組氨酸標簽蛋白的用途；其中，該鎳螯合磁性納米顆粒為一種螯合鎳的酒石酸氫鈉修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒，通過如下步驟制備：

步驟（1）：采用共沉淀法制備獲得四氧化三鐵磁性納米粒子，與酒石酸氫鈉常溫超聲反應獲得酒石酸氫鈉包裹的四氧化三鐵磁性納米顆粒；然后將上述磁性納米顆粒分散于去離子水中，逐滴加入NaOH溶液，使溶液的pH達到9.0-10.0之間，以保證磁性顆粒表面的羧酸根呈羧酸鹽狀態，磁分離，除去NaOH溶液；最后用去離子水洗滌，保存于水溶液中；

步驟（2）：將上述經過NaOH處理的磁性納米顆粒溶液加入NiSO₄溶液中，超聲反應，反應結束后進行磁分離，沉淀用去離子水洗滌，以去除多余的NiSO₄，最終得到螯合鎳的酒石酸氫鈉修飾的四氧化三鐵納米顆粒；

其中：

NaOH溶液的濃度為0.10 mol·L^-1，NiSO₄溶液的濃度為10 mg·mL^-1；

步驟（2）超聲反應4h。

2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于：將所述鎳螯合磁性納米顆粒用于分離純化組氨酸標簽蛋白包括如下步驟：

步驟（1）：將表達六個組氨酸標簽的重組蛋白的大腸桿菌經異丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷誘導表達后，收集菌液，加入蛋白提取裂解液后進行超聲破碎，高速離心后取上清即為大腸桿菌總蛋白溶液；

步驟（2）：將鎳螯合磁性納米顆粒加入細菌總蛋白溶液，重懸納米顆粒，于4℃旋轉結合1 h，磁分離，上清為磁性材料吸附后的上清溶液；

步驟（3）：將步驟（2）獲得的吸附蛋白的磁性顆粒用50×咪唑溶液震蕩洗滌10 min，磁分離，棄上清，重復洗滌3次，以洗脫未吸附的蛋白；

步驟（4）：在步驟（3）得到的磁性材料中加入250×咪唑溶液，旋轉洗脫10 min，磁分離后的上清即為分離純化后的組氨酸標簽重組蛋白。