[發(fā)明專利]一種沼液微生物DNA的提取試劑盒及提取方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110458408.3
• 申請日: 2021-04-27
• 公開（公告）號: CN112899271A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉蘭英;呂新;黃薇;陳麗華;李玥仁;宋永康
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 李博

1.一種沼液微生物DNA的提取試劑盒，包括裂解緩沖液、副裂解緩沖液、雜質(zhì)沉淀液、DNA結(jié)合液，其特征在于，所述裂解緩沖液包含50～100mmol/L Tris-HCl，50～100mmol/LNaCl，25～50mmol/L EDTA，1％～2％PVP 40，pH 7.0～8.0；所述副裂解緩沖液包含10％～20％SDS；所述雜質(zhì)沉淀液包含2～2.5mol/LKAC，pH 5.0～6.0；所述DNA結(jié)合液包含5～6mol/L異硫氰酸胍和50～100mmol/L Tris-HCl，pH 5.5～6.5。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取試劑盒，其特征在于，所述提取試劑盒還包括漂洗緩沖液，所述漂洗緩沖液包含10～20mmol/L Tris-HCl，pH 7.0～8.0，80～100mmol/L NaCl，體積濃度70％～80％乙醇。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取試劑盒，其特征在于，所述提取試劑盒還包括DNA洗脫液，所述DNA洗脫液包含5～10mmol/L Tris-HCl，pH 7.5～8.5。

4.權(quán)利要求1～3所述任意一項(xiàng)提取試劑盒在沼液微生物DNA提取中的應(yīng)用。

5.一種沼液微生物DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

利用細(xì)胞篩網(wǎng)對沼液進(jìn)行過濾，富集沼液微生物，再使用權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述提取試劑盒提取所述富集沼液微生物的基因組DNA。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述細(xì)胞篩網(wǎng)的孔徑為100μm。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述使用提取試劑盒提取富集沼液微生物的基因組DNA，包括富集的沼液微生物依次經(jīng)所述裂解緩沖液和所述副裂解緩沖液處理后離心，所得上清液與所述雜質(zhì)沉淀液混合沉淀，離心得到的上清液與所述DNA結(jié)合液混合，將混合液加入DNA吸附柱中離心吸附，完畢后進(jìn)行漂洗和洗脫得到沼液微生物DNA。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述沼液微生物與所述裂解緩沖液混合后，加入RNaseA靜置裂解，再加入所述副裂解緩沖液下溫育裂解，離心得上清液。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述雜質(zhì)沉淀液與裂解離心上清液混合，冰浴沉淀。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述DNA吸附柱用所述漂洗緩沖液漂洗，將所述DNA洗脫液預(yù)熱后對漂洗后的DNA吸附柱進(jìn)行洗脫，離心得到沼液微生物DNA。