[發(fā)明專利]一種攜帶STAT結(jié)合基序的嵌合抗原受體分子及表達(dá)該嵌合抗原受體分子的NK細(xì)胞

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110455442.5
• 申請日: 2021-04-26
• 公開（公告）號: CN113512125A
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李香群;陳波
• 申請（專利權(quán)）人: 北京雙贏科創(chuàng)生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10
• 代理公司: 北京知呱呱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11577
• 代理人: 杜立軍

本發(fā)明公開了一種攜帶STAT結(jié)合基序的嵌合抗原受體分子以及表達(dá)該嵌合抗原受體分子的NK細(xì)胞。所述嵌合抗原受體分子包括：從N?末端到C?末端依次為(1)識別靶抗原的抗體單鏈可變區(qū)；(2)跨膜結(jié)構(gòu)域；(3)共刺激結(jié)構(gòu)域；(4)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；(5)STAT結(jié)合基序。本發(fā)明實施例利用NK細(xì)胞中特有的的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)元件與影響NK細(xì)胞增殖的信號通路，以此優(yōu)化CAR?NK中CAR分子的共刺激分子結(jié)構(gòu)域、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)域及其組合，以提高CAR?NK細(xì)胞在體內(nèi)的增殖能力、持續(xù)時間，進(jìn)而發(fā)揮最佳治療療效的同時降低副作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種攜帶STAT結(jié)合基序的嵌合抗原受體分子及表達(dá)該嵌合抗原受體分子的NK細(xì)胞。

背景技術(shù)

NK細(xì)胞是一種天然免疫細(xì)胞，占外周血淋巴細(xì)胞的10-15％左右。NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用受其表面的激活性受體與抑制性受體共同調(diào)控，激活性受體包括自然細(xì)胞毒受體(NCRs)，例如NKG2D、CD16(FcgRIIIa)、FasL、腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)與共刺激受體例如LFA-1、CD244 (2B4)、and CD137(41BB)。這些激活性受體通過胞漿內(nèi)的免疫受體酪氨酸激活基序(ITAMs)與其它跨膜信號橋接轉(zhuǎn)導(dǎo)子觸發(fā)細(xì)胞裂解程序、細(xì)胞因子與趨化因子的分泌。NK細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與T細(xì)胞不同，NK細(xì)胞活化需要細(xì)胞膜表面多個激活受體交聯(lián)，才能引起細(xì)胞內(nèi)ITAM磷酸化。NKG2D是表達(dá)在CD8 T細(xì)胞與NK細(xì)胞表面的強(qiáng)激活性受體，但它的膜定位與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)依賴于另一膜蛋白DNAX激活蛋白(DAP10)，DAP10含有YxxM信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基序，可以激活PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。2B4是屬于SLAM家族的NK細(xì)胞特異性共刺激受體，其胞內(nèi)域通過與SLAM相關(guān)蛋白(SAP)相互作用傳遞NK細(xì)胞活化信號。

NK細(xì)胞無需抗原致敏即可廣泛識別與殺傷各類腫瘤細(xì)胞，其抗腫瘤作用不受MHC限制，可進(jìn)行異體回輸而不會引起移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)，因此，經(jīng)過基因修飾的NK細(xì)胞既具有了對腫瘤細(xì)胞殺傷的靶向性，又保留著本身的“off-the-shelf”特性，可實現(xiàn)異體回輸，具有通用性，便于標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)模化。鑒于此，NK細(xì)胞目前成為嵌合抗原受體(Chimeric Antigen receptor,CAR)治療的新的效應(yīng)細(xì)胞之一。

嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor,CAR)是一個人工合成的融合受體，在結(jié)構(gòu)上包括胞外抗原結(jié)合區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)與共刺激信號區(qū)。胞外區(qū)為識別腫瘤相關(guān)抗原的抗體單鏈可變區(qū)序列(single chain variable fragment，ScFV)，跨膜區(qū)連接胞外區(qū)與胞內(nèi)區(qū)，常用的跨膜區(qū)分子有CD3、 CD4、CD8與CD28等。人們通過分子克隆方法將上述元件在體外進(jìn)行重組，形成重組質(zhì)粒，通過病毒載體、電穿孔等手段將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)入效應(yīng)細(xì)胞，繼之在體外培養(yǎng)擴(kuò)增，最后回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)，起到治療腫瘤或感染性疾病的目的。這種經(jīng)過基因修飾與改造的NK細(xì)胞即稱為CAR NK細(xì)胞。CAR NK細(xì)胞通過ScFV段識別并結(jié)合抗原，通過胞內(nèi)信號區(qū)激活NK細(xì)胞，這樣改造的CAR NK細(xì)胞在應(yīng)用時就具有了兩大特點：①靶向性；②通用性。目前，已有多項 CAR NK產(chǎn)品進(jìn)行了臨床試驗，例如(ClinicalTrials.gov:NCT00995137, NCT01974479，NCT02839954，NCT02892695，NCT02742727，and NCT02944162)。2020年，Liu等將CD19 CAR NK細(xì)胞治療淋巴瘤的I、II期臨床試驗結(jié)果公布在新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志上，11例入組病人當(dāng)中，8人有應(yīng)答 (73％)，其中4例病人完全緩解，完全緩解率為25％，這顯示CAR NK細(xì)胞治療是一種有前景的細(xì)胞治療。