[發明專利]一種具有脂肪酶活性的蛋白PnlipA及其基因和應用

有效

• 申請號: 202110454279.0
• 申請日: 2021-04-26
• 公開（公告）號: CN113151214B
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發明（設計）人: 林敏;周正富;張維;龐雨
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/11;C12R1/19
• 代理公司: 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 王浩然

本公開涉及一種具有脂肪酶活性的蛋白PnlipA、編碼該蛋白的基因、插入有該基因的重組載體、轉化有該基因的轉化體、擴展該基因的引物、制備脂肪酶的方法和脂肪酶在降解脂肪類化合物中的應用。本公開為新型脂肪酶的應用提供了極大的方便，更好地滿足了脂肪酶在實際工業應用中的需求。

技術領域

本公開涉及基因工程技術領域，具體地，涉及一種具有脂肪酶活性的蛋白、編碼該蛋白的基因、插入有該基因的重組載體、轉化有該基因的轉化體、擴展該基因的引物、制備脂肪酶的方法和脂肪酶在降解脂肪類化合物中的應用。

背景技術

脂肪酶是重要的工業酶制劑品種之一，可以催化解脂、酯交換、酯合成等反應，廣泛應用于油脂加工、食品、醫藥、日化等工業。脂肪酶在自然界中普遍存在，是從植物、動物和微生物中分離出來的。其中，微生物脂肪酶主要來源于真菌和細菌，其產生時間短，易于遺傳操作、規模擴大和純化，有利于工業應用，與真菌脂肪酶相比，細菌脂肪酶通常使用更多，并且表現出更高的活性，在生物技術應用領域有著重要的作用。

但是，目前脂肪酶仍然不能完全滿足實際應用的需求，仍然需要提高產量以進一步降低生產成本和/或進一步提高催化活性。因此，需要探索和發現更多的脂肪酶。

發明內容

為了進一步滿足實際應用的需求，本公開提供了具有脂肪酶活性的蛋白PnlipA、編碼該蛋白的基因、插入有該基因的重組載體、轉化有該基因的轉化體、擴展該基因的引物、制備脂肪酶的方法和脂肪酶在降解脂肪類化合物中的應用。

本公開第一方面提供了一種具有脂肪酶活性的蛋白，所述蛋白為如下蛋白(a)或(b)：

(a)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列組成的蛋白；

(b)在(a)中的氨基酸序列經過取代、缺失或添加n個氨基酸且具有脂肪酶活性的由(a)衍生的蛋白，其中，n為1～28之間的任意一個整數。

本公開第二方面提供了一種編碼如下蛋白(a)或(b)的基因：

(a)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列組成的蛋白；

(b)在(a)中的氨基酸序列經過取代、缺失或添加n個氨基酸且具有脂肪酶活性的由(a)衍生的蛋白，其中，n為1～28之間的任意一個整數。

本公開第三方面提供了一種重組載體，所述重組載體插入有第二方面所述的基因。

本公開第四方面提供了一種轉化體，所述轉化體的宿主為基因工程菌；所述轉化體中導入的基因包括第二方面所述的基因，或者，所述轉化體中導入的重組載體包括第三方面所述的重組載體。

本公開第五方面提供了一種引物，所述引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物是核苷酸序列為SEQ ID NO.4所示的DNA分子；所述反向引物是核苷酸序列為SEQ IDNO.5所示的DNA分子。

本公開第六方面提供了一種制備脂肪酶的方法，所述方法包括：將第四方面所述的轉化體接種于培養基中進行培養，得到培養后的物料。

本公開第七方面提供了一種脂肪酶在降解脂肪類化合物中的應用，其中，所述脂肪酶含有第一方面所述的蛋白。

通過上述技術方案，本公開提供了具有脂肪酶活性的蛋白、編碼該蛋白的基因、插入有該基因的重組載體、轉化有該基因的轉化體、擴展該基因的引物、制備脂肪酶的方法和脂肪酶在降解脂肪類化合物中的應用，為低成本生產高產新型的脂肪酶奠定基礎，在油脂加工、食品、醫藥、日化等工業產業中具有重要的應用潛力。

本公開的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。

附圖說明

附圖是用來提供對本公開的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與下面的具體實施方式一起用于解釋本公開，但并不構成對本公開的限制。在附圖中：