[發明專利]一種水稻秸稈降解菌及其篩選方法和應用

有效

• 申請號: 202110449340.2
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN113122460B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 田康明;曲麗君;張見;李萍;邢軍;李欣屹;金鵬;金瑞
• 申請（專利權）人: 天津科技大學;天津天豐澤田生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12Q1/04;C05F15/00;C05F17/20;C05F17/50;C12R1/645
• 代理公司: 天津合正知識產權代理有限公司 12229
• 代理人: 王雨杰

本發明創造提供了一種水稻秸稈降解菌及其篩選方法和應用，菌株為東方伊薩酵母菌株，該菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC?NO.21582。本發明創造所述的水稻秸稈降解菌以水稻秸稈粉為主要碳源發酵后的粗酶液中纖維素酶酶活力達到30.5U/mL，漆酶酶活力達到188.54U/mL，還原糖濃度達到20.6g/L。

技術領域

本發明創造屬于生物質加工領域，尤其是涉及一種水稻秸稈降解菌及其篩選方法和應用。

背景技術

由于我國是農業生產大國，每年產生的水稻秸稈數量巨大，目前，對于水稻秸稈的處理方式一般將其焚燒，這不僅造成資源的浪費，在焚燒過程中也會進一步造成環境的污染。為解決這個問題，國家鼓勵秸稈還田和秸稈資源化利用，發展生態農業。水稻秸稈直接還田會造成土壤營養失調，有機酸積累等問題，故研究如何將水稻秸稈生化處理后進行資源化再利用是目前的主要發展方向，也十分迫切。

水稻秸稈中含有豐富的纖維素、半纖維素、木質素、碳水化合物、糖類、脂類、礦物質等組分，是制備生物肥料的理想原料。但由于水稻秸稈中纖維素、半纖維素、木質素的存在使得降解困難，如何篩選出能夠高效降解水稻秸稈的微生物，提高漆酶和纖維素酶的產量，是本領域亟待解決的技術問題。

發明內容

有鑒于此，本發明創造旨在克服現有技術中的缺陷，提出一種水稻秸稈降解菌及其篩選方法和應用。

為達到上述目的，本發明創造的技術方案是這樣實現的：

一種水稻秸稈降解菌株，所述的菌株為東方伊薩酵母菌(Issatchenkiaorientalis)PTQJ-19-02，該菌株已于2021年1月4日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為：CGMCC?NO.21582。

本發明還提供上述的水稻秸稈降解菌在制備水稻秸稈酵儲料中的應用。

本發明還提供上述的的水稻秸稈降解菌株的篩選方法，該篩選方法包括如下步驟：

(1)稱取菌源樣本，溶于滅菌生理鹽水中，配制成懸濁液,用無菌生理鹽水進行10倍梯度稀釋至10^-7倍，分別選取原液及每個稀釋梯度的懸濁液100μL涂布至以愈創木酚、蒽酮、鄰聯甲苯胺、聯苯胺、沒食子酸為底物的培養基上，挑選培養基上出現氧化帶的菌株，利用愈創木酚-PDA平板法篩選漆酶高產菌株；

(2)將步驟(1)篩選得到的菌株制備成菌液，分別均勻涂布至羧甲基纖維素鈉篩選固體培養基,25-30℃倒置培養2-4d后,挑選有透明圈的單菌落，劃線，于羧甲基纖維素鈉固體培養基上進行純化培養2-4d，然后挑取相應的單菌落置于羧甲基纖維素鈉液體培養基的三角瓶中，恒溫震蕩培養24-72h，保藏至-50--80℃，最終得到的菌株為初篩菌株；

(3)將篩選得到的初篩菌株的菌液分別均勻涂布至木聚糖篩選固體培養基，25-30℃倒置培養2-4d后,挑選有透明圈的單菌落，劃線，于木聚糖固體培養基上進行純化培養2-4d，然后挑取相應的單菌落置于木聚糖液體培養基的三角瓶中，恒溫震蕩培養2-4d，保藏至-50--80℃，最終得到的菌株為水稻秸稈降解菌株。

優選地，所述步驟(2)中的羧甲基纖維素鈉篩選固體培養基配方為羧甲基纖維素鈉5-20g、KH₂PO₄?1-5g、MgSO₄·7H₂O?0.5-0.7g、NaNO₃?0.5-3g、瓊脂粉10-20g、蒸餾水1000mL。