[發明專利]抗VISTA蛋白的單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110449149.8
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN112940125B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 楊清海;陳惠玲;王小亞;付利利;陳瀅;李婷
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓;林祥翔

本發明涉及一種可以識別人VISTA抗原的單克隆抗體，分泌細胞株、其制備方法以及其在免疫檢測中的用途。上述技術方案選取VISTA蛋白C末端的第269位至第289位氨基酸為抗原肽,偶聯KLH后得到的免疫原對小鼠進行免疫，經細胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗VISTA蛋白單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株11A4,以及由該細胞株所分泌的抗VISTA蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達VISTA蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物醫學工程領域，特別涉及一種抗VISTA蛋白單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用。

背景技術

VISTA（V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cellactivation，激活的免疫球蛋白），是一種近期發現的免疫負調節檢查點，限制了T細胞有效攻擊腫瘤的能力。人類VISTA與小鼠有90%同源性。同鼠科一樣，人VISTA大多在造血組織或者大量白細胞浸潤的組織中提取，這是對VISTA免疫相關功能的重要提示。VISTA蛋白在人體內的表達與自體血供有明顯的相關性，其中胎盤、肺臟、脾臟和白細胞中表達量往往最高，而在細胞水平上則以巨噬細胞、脾CD11b+單核細胞、CD11c+樹突狀細胞、CD4+T細胞和CD8+T細胞上表達較高，在B細胞上則少有表達。

近年來，T細胞免疫抑制方面有著明確功能的新的靶標分子出現，即免疫檢查點分子T細胞激活抑制物免疫球蛋白可變區結構域（VISTA），前期的動物實驗證實：封閉了VISTA靶點、將VISTA與其他免疫檢查點抑制劑，例如PD-1（程序性死亡因子）聯合使用都能起到殺傷腫瘤的作用。VISTA與PD-L1具有同源性，且VISTA與PD-1／PD-L1有著不同信號通路，來抑制T細胞免疫活性。

在對抗PD-1或抗CTLA-4的腫瘤免疫治療時出現獲得性抵抗機制的研究中，發現VISTA可能代表另一個補償性的抑制性通路。在腫瘤的抗PD-1/CTLA4治療出現獲得性免疫抵抗時，結合VISTA和PD-1/CTLA4聯合阻滯可能是癌癥治療的一個有前途的新選擇。VISTA免疫檢查點已逐漸成為腫瘤免疫抑制劑治療研宄的熱點，并在肺癌、胃癌、黑色素瘤、口腔鱗狀細胞癌、前列腺癌等腫瘤中已有相關研究報道。

發明內容

發明人提供了一種抗VISTA蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID NO.4 所示的氨基酸序列；所述單克隆抗體輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體的重鏈可變區的DNA序列為SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述單克隆抗體的輕鏈可變區的DNA序列為SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別VISTA蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體為小鼠IgG_2a亞型單克隆抗體。

進一步地，所述抗VISTA單克隆抗體由保藏號為CGMCC NO 20766的雜交瘤細胞株產生。

發明人又提供了一種抗VISTA蛋白單克隆抗體的制備方法，選取VISTA蛋白中SEQID NO. 1所示的氨基酸序列(第269位至第289位), 在其羧基端添加了一個半胱氨酸后，與載體蛋白KLH進行偶聯作為免疫原。

發明人還提供了一株分泌抗VISTA蛋白分子的雜交瘤細胞株，所述細胞株為小鼠雜交瘤細胞株11A4，所述細胞株已于2020年9月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC NO 20766，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。

發明人還提供了上述單克隆抗體在VISTA蛋白免疫檢測中的用途。