[發明專利]一種基于熒光RMA法聯合檢測三種生殖道病原體的引物探針組

在審

• 申請號: 202110448486.5
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN113046454A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 陳龍;陳大為;張瑤
• 申請（專利權）人: 濟南國益生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/36
• 代理公司: 濟南信在專利代理事務所(特殊普通合伙) 37271
• 代理人: 黃波

本申請屬于生物檢測技術領域，具體為一種基于熒光RMA法聯合檢測三種生殖道病原體的引物探針組，屬于生物檢測技術領域。該試劑盒中包括有：含有擴增反應試劑的檢測管、緩沖液、醋酸鎂、標準陽性質粒、無菌雙蒸水。所述含有擴增反應試劑的檢測管中同時包括檢測沙眼衣原體（CT）、淋病奈瑟菌（NG）、解脲脲原體（UU）的引物對及對應的探針。本發明能在同一反應管內同時檢測沙眼衣原體、淋病奈瑟菌、解脲脲原體三種常見生殖道病原體核酸，操作簡單，價格低廉，可高效、快速、準確地檢測出相關的生殖道病原體，對性病的診療和防治具有重要意義。

技術領域

本申請屬于生物檢測技術領域，具體為一種基于熒光RMA法聯合檢測三種生殖道病原體的引物探針組。

背景技術

性傳播疾病(STD)是主要通過性接觸傳播的一類泌尿生殖道感染性疾病，引起泌尿生殖道感染的生殖道病原體主要包括沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，CT)、淋病奈瑟菌(Neisseria Gonorrhoeae，NG)、解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum，UU)等，其感染不僅可以引起尿道炎、附睪炎、子宮內膜炎、盆腔炎和輸卵管炎等，嚴重的還可以導致育齡婦女不孕、流產、早產等不良孕產史，嚴重危害兩性健康。而臨床上存在高比例的混合感染，且多重及慢性持續性泌尿生殖道感染可導致性病的廣泛傳播以及發生嚴重的并發癥，給臨床診療和預防控制帶來困難，因此快速、高通量檢測生殖道病原體對性病的診療和防治具有重要意義。

目前沙眼衣原體、解脲脲原體和淋病奈瑟菌的實驗室檢測方法主要有培養法、免疫學方法、分子生物學方法等。培養法雖然特異性較高，但所需時間長，操作復雜，易漏檢或誤檢，而且有些病原體如UU培養靈敏度較低；用免疫學方法檢測病原體抗原靈敏度低，易出現假陰性問題，而檢測抗體存在“窗口期”問題，同時不能判定是現癥感染還是既往感染；PCR技術需要經過培訓的專業人員和復雜的儀器設備，且存在易交叉污染等缺點。

因此，近年來不需要熱循環儀的等溫擴增方法應運而生。其中重組酶介導擴增(Recombinase MediatedAmplification,RMA)技術，被認為是可替代PCR的核酸檢測技術，主要依賴重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶三種酶。RMA反應可以在37～42℃進行，整個過程在30min內即可達到檢測水平，可實現核酸的快速檢測。RMA反應的擴增產物可以通過實時熒光法進行檢測。其中，探針上攜帶有堿基替代物dSpcacer(四氫呋喃)，dSpcacer的5’端有熒光基團、3’端有淬滅基團。擴增時，核酸外切酶III從dSpcacer處切割探針使熒光基團與淬滅基團分開，熒光信號得以釋放，且得到可延伸的3’-OH，在DNA聚合酶作用下可繼續進行DNA延伸。隨著反應進行，熒光信號逐漸增強，可以通過實時熒光檢測儀檢測。

本發明正是在熒光RMA法的基礎上開發了聯合檢測沙眼衣原體(CT)、淋病奈瑟菌(NG)、解脲脲原體(UU)三種常見生殖道病原體的試劑盒，可廣泛用于生殖道病原體的輔助診斷，指導臨床用藥等多個領域。

發明內容

為了解決現有技術的問題，本申請提供了一種基于熒光RMA法聯合檢測三種生殖道病原體的引物探針組，本申請是通過下述方案實現的：

一種基于熒光RMA法聯合檢測三種殖道病原體的引物探針組，包括檢測沙眼衣原體(CT)的引物對及對應的探針、檢測淋病奈瑟菌(NG)的引物對及對應的探針以及檢測解脲脲原體(UU)的引物對及對應的探針，其中：

(1)CT引物和探針序列為：

CT-F：

5’-CTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCTAT-3’；

CT-R：

5’-CGGTGCTTCTTTACCTGGTACGCTCAAATCCAG-3’；

CT-P：