[發明專利]基于樹突狀細胞的口蹄疫仿生納米疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110446811.4
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN113181354B
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發明（設計）人: 常惠蕓;高瞻;邵軍軍;常艷燕
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: A61K39/135
• 分類號: A61K39/135;A61K9/51;A61K47/46;A61K47/34;A61P31/14;A61K38/20
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時亞娟

本發明涉及基于樹突狀細胞的口蹄疫仿生納米疫苗及其制備方法和應用，屬于藥物制劑與生物醫藥技術領域。所述仿生納米疫苗為具有核殼結構的納米顆粒，內核為包裹細胞因子IL?2的納米荷載顆粒、外層為攜帶口蹄疫抗原信息的樹突狀細胞膜。仿生納米顆粒自由運輸至淋巴結后，能被細胞高效識別捕獲，釋放細胞因子IL?2激發固有免疫應答，仿生化樹突狀細胞膜遞呈口蹄疫病毒抗原信息刺激免疫細胞產生特異性免疫應答，即產生保護性中和抗體。最終仿生納米顆粒的兩種組分通過協同效應提高免疫效果。本發明口蹄疫仿生納米疫苗是一種免疫后能夠早期產生中和抗體的新型疫苗，對通過疫苗免疫凈化和根除口蹄疫具有十分重要的意義。

技術領域

本發明涉及藥物制劑領域與生物醫藥技術領域，具體來說涉及一種針對口蹄疫的仿生納米疫苗及其制備方法。

背景技術

口蹄疫（foot-and-mouth，FMD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth?disease，FMDV）引起豬、牛、羊等偶蹄獸發生的一種急性、烈性，高度接觸性、可快速遠距離傳播的傳染病，該病的暴發會給當地帶來嚴重的經濟損失，世界動物衛生組織（OIE）將其列為必須通報的動物疫病。口蹄疫病毒粒子無囊膜，呈二十面體對稱，有A、O、C、Asia-1、SAT-1、SAT-2和SAT3七個血清型，血清型間無交叉免疫保護。口蹄疫滅活疫苗在FMD防控和根除中發揮十分重要的作用，但生產滅活疫苗具有諸多缺點，如需要動用活病毒和高級別的生產車間，存在生物安全隱患；一些流行毒株難以適應細胞，無法制備疫苗；疫苗研發周期長，需要多次免疫維持長期免疫等。

近年研究表明，細胞膜可以作為獨特的生物學材料在納米醫學發揮重要作用，生物膜仿生納米顆粒既具有原生物膜的固有屬性，不僅能夠改善其生物相容性，顯著延長其在機體內的循環存留時間，還能夠發揮細胞膜表面的特異性功能。例如可以通過調整生物膜覆層的種類像紅細胞膜、巨噬細胞膜、外泌體膜或樹突狀細胞膜來發揮不同的生物膜功能。而納米顆粒核心不僅可以起到支撐作用，還可以通過調整負載物，例如不同種類的細胞因子、核酸或殼聚糖整合肝素包封蛋白制備新型核酸疫苗和亞單位疫苗。例如有研究學者以癌細胞膜為涂層，制備核-殼納米結構，將從帶有完整癌細胞膜抗原納米顆粒與免疫佐劑偶聯，證明所得制劑能夠靶向癌細胞遞送藥物，并顯示出腫瘤特異性免疫應答。還有學者開發了以巨噬細胞膜包被的納米顆粒，用于響應腫瘤微環境刺激緩釋藥物的腫瘤靶向遞送。

仿生納米負載顆粒已經顯現出它的優異效果，如今可以通過改造修飾得到不同需求的仿生納米顆粒。

發明內容

本發明的目的一在于提供一種樹突狀細胞膜囊泡包裹荷載細胞因子IL-2的仿生納米疫苗，目的二在于提供所述仿生納米疫苗的制備方法，目的三在于提供所述仿生納米疫苗在預防O型口蹄疫中的應用。

本發明所述口蹄疫仿生納米疫苗為一種仿生納米顆粒，通過顆粒表面樹突狀細胞膜攜帶的抗原信息，靶向遞呈樹突狀細胞誘發特異性免疫應答反應，通過釋放的細胞因子IL-2，激發固有免疫反應，從而實現早期快速激發系統免疫反應，提供早期和持久的免疫保護。

本發明中，將荷載細胞因子IL-2的納米荷載顆粒和樹突狀細胞膜進行融合，獲得由樹突狀細胞囊泡包裹的穩定仿生納米疫苗，所述仿生納米疫苗是以納米荷載顆粒為核心、以樹突狀細胞膜作為外殼。

在本發明中，所述仿生納米疫苗的粒徑為100-200nm，所述納米荷載顆粒的粒徑為100-200nm。

本發明中，所述樹突狀細胞囊泡是通過口蹄疫滅活病毒抗原刺激樹突狀細胞制備，使得仿生納米疫苗攜帶口蹄疫病毒抗原信息。進一步地，所述口蹄疫滅活病毒抗原為O型口蹄疫滅活病毒抗原。

本發明中，所述樹突狀細胞囊泡包裹的仿生納米載體，包括聚合物核心納米顆粒和樹突狀細胞囊泡；其中，聚合物材料為PLGA，或PLA，或磷脂材料等。

本發明中，所述納米荷載顆粒的納米載體材料為聚乳酸-羥基乙酸。