[發(fā)明專利]含miR-124的膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110446548.9
• 申請(qǐng)日: 2021-04-25
• 公開（公告）號(hào): CN113082216B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 池光范;葛鵬飛;于逸飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K47/46
• 分類號(hào): A61K47/46;A61K31/7105;A61P25/00;C12N5/09
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 薛紅凡

1.一種含miR-124的膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體在制備治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷疾病的藥物中的應(yīng)用，所述含miR-124的膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體的制備方法，包括以下步驟：

1)將膠質(zhì)瘤細(xì)胞系培養(yǎng)得到的上清液經(jīng)固液分離，得到外泌體；

2)將所述外泌體和miR-124混合，共同孵育，得到含miR-124的膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體；所述miR-124為膽固醇修飾的miR-124-3P mimic；所述外泌體的質(zhì)量和miR-124的體積比為1000μg：(45～55)μl；

所述miR-124的濃度為18～22μM。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于，步驟2)中所述共同孵育的溫度為35～38℃；

所述共同孵育的時(shí)間為1～1.5h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于，所述共同孵育后，將孵育產(chǎn)物進(jìn)行純化；所述純化的方法為將孵育產(chǎn)物經(jīng)固液分離，收集固相，用PBS緩沖液洗滌和重懸，經(jīng)離心得到含miR-124的膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述應(yīng)用，其特征在于，步驟1)中所述固液分離包括離心和過濾；

所述固液分離的方法為將所述上清液依次經(jīng)2800～3200g和9000～11000g離心力進(jìn)行離心，收集沉淀后濾膜過濾，再經(jīng)11500～12500g離心。