[發(fā)明專利]一種檢測羅布麻殼針孢的引物及其試劑盒和檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110446045.1
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN112961937A
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 段廷玉;冉陽露;藍(lán)艷茹
• 申請（專利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京匯捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11531
• 代理人: 林楊

本發(fā)明適用于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種檢測羅布麻殼針孢的引物及其試劑盒和檢測方法，本發(fā)明利用分子生物學(xué)方法進行快速檢測羅布麻殼針孢菌，特別是基于羅布麻殼針孢rDNA?ITS序列設(shè)計了用于快速檢測羅布麻殼針孢的引物，具有特異性好、靈敏度高、操作簡便快速的優(yōu)點，為羅布麻的生產(chǎn)提供了保障。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測羅布麻殼針孢的引物及其試劑盒和檢測方法。

背景技術(shù)

羅布麻（Apocynum venetum）又稱野麻、野茶、紅麻、紅花草、茶葉棵子等，主要分白麻和紅麻兩種，為夾竹桃科（Apocynaceae）直立半灌木或多年生宿根草本植物。從全球分布情況來看，零星在北緯36°以北，日本北海道、中亞地區(qū)、北美、俄羅斯、地中海沿岸以及朝鮮和蒙古等地均有分布。中國是世界上羅布麻分布面積最大的國家，三個主要分布區(qū)為西北內(nèi)陸的白麻和紅麻干旱分布區(qū)、北部的紅麻半干旱分布區(qū)、沿海及內(nèi)地的紅麻半濕潤及濕潤分布區(qū)，在新疆、吉林、青海、河南、山西等十幾個省市和自治區(qū)廣泛分布，其中數(shù)新疆維吾爾自治區(qū)羅布麻的分布面積最為廣闊。因其具有特殊的組織和器官，如，薄葉片下表皮分布的氣孔器形成孔下室，根、莖的皮層內(nèi)含有深色貯藏物質(zhì)，莖環(huán)繞內(nèi)生韌皮部，根系粗壯，木質(zhì)部發(fā)達(dá)等，使得羅布麻的生存能力極強，多生長于寒冷、干旱、鹽堿的荒漠地區(qū)，具有耐鹽堿、耐干旱、耐高溫、耐霜凍、耐風(fēng)沙侵蝕等特點，成為保持水土、涵養(yǎng)水源、改良土壤、調(diào)節(jié)氣候、防風(fēng)固沙的荒漠植物之一，同時在制藥、制茶和紡織等方面也充當(dāng)著重要角色，具有良好的經(jīng)濟價值和生態(tài)效益。

羅布麻殼針孢（Septoria apocyni）引致的斑枯病是一種嚴(yán)重威脅羅布麻產(chǎn)量及品質(zhì)的病害，嚴(yán)重阻礙了羅布麻產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。蘭州大學(xué)團隊對新疆阿勒泰地區(qū)羅布麻的病害普查與真菌區(qū)系的研究中發(fā)現(xiàn)，新疆阿勒泰地區(qū)野生羅布麻斑枯病的發(fā)病率較高，最高可達(dá)13.8%，其主要危害羅布麻葉片與莖稈，在植株上形成輪紋狀病斑，后期病斑連接，感病部位葉片極易凋落，嚴(yán)重時羅布麻呈燒焦?fàn)羁菟溃瑖?yán)重影響植株生產(chǎn)性能及防風(fēng)固沙作用。斑枯病亦可顯著影響羅布麻的生理生化功能，對斑枯病嚴(yán)重度分級和光合生理特征的研究中發(fā)現(xiàn)，除胞間CO₂濃度外，隨著斑枯病嚴(yán)重度的增加，羅布麻葉片凈光合速率、蒸騰速率和氣孔導(dǎo)度顯著下降，當(dāng)嚴(yán)重度達(dá)到4級以上，凈光合損失率＞50%，葉片相對病斑面積和相對變色面積均可達(dá)到30%以上。

目前，實施斑枯病病害防治的措施主要是基于定期、大規(guī)模的田間發(fā)病率及其病情指數(shù)的調(diào)查。發(fā)現(xiàn)發(fā)病中心，盡量控制其不能快速傳播，起到預(yù)防及預(yù)測預(yù)報的作用；其次是使用殺菌劑進行防治。研究也表明，在病菌定殖早期進行防治，較發(fā)病后期防效可高80%以上。然而，定期、大規(guī)模的田間病情的調(diào)查方法，既費時費力又不能夠準(zhǔn)確的預(yù)測病害的發(fā)生，其結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信度在很大程度上取決于調(diào)查測報人員的技術(shù)水平和經(jīng)驗，難以滿足快速、高效診斷檢測的實際需求。

由此可見，現(xiàn)有的斑枯病病害防治方法存在診斷效率、準(zhǔn)確性和可信度低的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明實施例的目的在于提供一種檢測羅布麻殼針孢的引物，旨在解決現(xiàn)有斑枯病病害防治方法存在診斷效率、準(zhǔn)確性和可信度低的問題。

本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種檢測羅布麻殼針孢的引物，所述引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物的引物序列為SEQ ID NO:1或者為所述引物序列的核苷酸互補序列，所述反向引物的引物序列為SEQ ID NO:2或者為所述引物序列的核苷酸互補序列。

本發(fā)明實施例的另一目的在于一種檢測羅布麻殼針孢的試劑盒，所述試劑盒含有上述的引物。

本發(fā)明實施例的另一目的在于一種檢測羅布麻殼針孢的檢測方法，其包括：

獲取待測樣本的DNA模板；