[發(fā)明專利]臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞制備的通用型血小板制劑及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110444119.8
• 申請日: 2021-04-23
• 公開（公告）號: CN113073078B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉沐蕓;廖延;傅澤欽;曾桂芳;伍世鐸;李端端;梁曉
• 申請（專利權(quán)）人: 個(gè)體化細(xì)胞治療技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室(深圳)
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N5/0775
• 代理公司: 廣東良馬律師事務(wù)所 44395
• 代理人: 張柯

1.一種臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞制備通用型血小板的方法，其特征在于，所述方法包括：

擴(kuò)增臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞；

對所述臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行多階段誘導(dǎo)處理，制備血小板制劑；其中，所述血小板為低免疫原性的通用型血小板;對所述臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行多階段誘導(dǎo)處理之前，所述方法包括：對獲取的新鮮臍帶進(jìn)行剝離獲取華通氏膠，并在原代培養(yǎng)基上對所述華通氏膠進(jìn)行原代培養(yǎng)，得到原代培養(yǎng)細(xì)胞；對所述原代培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，得到擴(kuò)增后的細(xì)胞用于后續(xù)操作；所述原代培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)體系；

所述對所述臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行多階段誘導(dǎo)處理的方法包括：對所述臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成脂誘導(dǎo)處理和血小板誘導(dǎo)處理；

所述成脂誘導(dǎo)處理為在成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基上對所述擴(kuò)增后的干細(xì)胞培養(yǎng)10-20天，得到成脂誘導(dǎo)后的細(xì)胞，其中，所述成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括：0.3mM的吲哚美辛、0.6mM的IBMX、0.4mM的羅格列酮、1.0μM的地塞米松、15μg/ml的胰島素、3mM的谷氨酰胺和體積比例為8％的胎牛血清；

所述血小板誘導(dǎo)處理為在血小板誘導(dǎo)培養(yǎng)基上對所述成脂誘導(dǎo)后的細(xì)胞培養(yǎng)4-16天，得到血小板誘導(dǎo)后的細(xì)胞，其中，所述血小板誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括：70ng/ml的促血小板生成素、10μg/ml的低密度脂蛋白、500μg/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白、30μM的復(fù)合核糖核苷酸、80μM的β-巰基乙醇、30μg/ml的人白細(xì)胞介素3、40μg/ml的人白細(xì)胞介素6、20μg/ml的人白細(xì)胞介素11、90ng/ml的干細(xì)胞生長因子、20μg/ml的胰島素和體積比例為5％的胎牛血清，所述復(fù)合核糖核苷酸為ATP、UTP、CTP和GTP。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

所述擴(kuò)增后的細(xì)胞的細(xì)胞代數(shù)為P3到P5之間，在所述后續(xù)操作進(jìn)行的前一天，所述擴(kuò)增后的細(xì)胞細(xì)胞融合度大于85％，并培養(yǎng)在37攝氏度，CO₂濃度為5％的培養(yǎng)箱中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：

對所述誘導(dǎo)處理后的細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行離心，收集血小板并進(jìn)行檢測，得到血小板制劑。