[發(fā)明專利]一種用于細(xì)胞培養(yǎng)基的脂質(zhì)混合物及其配制方法與應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110443305.X
• 申請日: 2021-04-23
• 公開（公告）號: CN113061578A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬士棋;陳旭;陳剛
• 申請（專利權(quán)）人: 依科賽生物科技（太倉）有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 孫永智

本發(fā)明公開了一種用于細(xì)胞培養(yǎng)基的脂質(zhì)混合物及其配制方法與應(yīng)用。所述脂質(zhì)混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、維生素E醋酸酯和聚醚F?68；所述脂質(zhì)混合物用于培養(yǎng)T細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基中；所述無血清培養(yǎng)基包括Lonza?X?VIVO?15supgt;TM/supgt;培養(yǎng)基、Corning?88?581?CM?DC/CIK細(xì)胞無血清培養(yǎng)基、Lonza?X?VIVO?15supgt;TM/supgt;無酚紅培養(yǎng)基中的一種，以及其他商品化T細(xì)胞無血清培養(yǎng)基。本發(fā)明的脂質(zhì)混合物不僅化學(xué)成分明確，而且配方簡化，性能優(yōu)異，加入T細(xì)胞無血清培養(yǎng)基中可有效提高T細(xì)胞增殖倍數(shù)和細(xì)胞活率，培養(yǎng)10天可在原商品化無血清培養(yǎng)基基礎(chǔ)上將T細(xì)胞擴增倍數(shù)提高200%以上，將終末細(xì)胞活率提高20%以上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種用于細(xì)胞培養(yǎng)基的脂質(zhì)混合物及其配制方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

T細(xì)胞是淋巴細(xì)胞的主要組成之一，具有多種生物學(xué)功能，可直接殺傷靶細(xì)胞，也可輔助其它淋巴細(xì)胞發(fā)揮功能，是身體抵御疾病感染、防止腫瘤形成的主要免疫細(xì)胞之一。在體外富集、活化、擴增T細(xì)胞，可回輸治療多種疾病，包括惡性腫瘤、自身免疫疾病等。在這個過程中，使用安全可靠的無血清培養(yǎng)基對T細(xì)胞進行體外擴增，可避免人源、動物源病原體的引入風(fēng)險，同時避免T細(xì)胞擴增體系匯總不明成分可能引起的機體免疫反應(yīng)，對后續(xù)T細(xì)胞治療產(chǎn)品的臨床應(yīng)用非常關(guān)鍵。

T細(xì)胞的體外擴增要使用能夠促進T細(xì)胞快速增殖且保持細(xì)胞活率的無血清培養(yǎng)基。而脂肪酸如棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇可用于合成細(xì)胞膜，是無血清培養(yǎng)基的重要組分。脂肪酸進入細(xì)胞后也可氧化分解成乙酰輔酶A，進入三羧酸循環(huán)，為細(xì)胞提供大量能量，促進T細(xì)胞生長。然而，棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇難溶于水，現(xiàn)有的商業(yè)化T細(xì)胞無血清培養(yǎng)基往往將脂肪酸和膽固醇直接加到培養(yǎng)基中，這樣會導(dǎo)致脂質(zhì)組分不穩(wěn)定，難以被細(xì)胞吸收。

綜上所述，如何提高脂肪酸和膽固醇在水中的溶解度，增加脂質(zhì)組分的穩(wěn)定性和吸收率，對于提高T細(xì)胞的細(xì)胞活率和增殖倍數(shù)有關(guān)鍵作用。因此，配制一種用于細(xì)胞培養(yǎng)基的脂質(zhì)混合物具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于細(xì)胞培養(yǎng)基的脂質(zhì)混合物及其配制方法與應(yīng)用，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種用于細(xì)胞培養(yǎng)基的脂質(zhì)混合物，所述脂質(zhì)混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、維生素E醋酸酯和聚醚F-68。

較為優(yōu)化地，所述脂質(zhì)混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.02~2mg葡聚糖、0.02~2mg維生素E醋酸酯、0.02~2mg聚醚F-68。

較為優(yōu)化地，所述脂質(zhì)混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.2mg葡聚糖、0.2mg維生素E醋酸酯、0.2mg聚醚F-68。

較為優(yōu)化地，所述脂肪酸混合物包括棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇其中一種或四種混合物。

較為優(yōu)化地，所述脂質(zhì)混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.01~0.5mg棕櫚酸、0.01~0.5mg棕櫚油酸、0.01~0.5mg硬脂酸和0.01~0.5mg膽固醇。

較為優(yōu)化地，所述脂質(zhì)混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.1mg棕櫚酸、0.1mg棕櫚油酸、0.1mg硬脂酸和0.1mg膽固醇。

較為優(yōu)化地，一種用于細(xì)胞培養(yǎng)基的脂質(zhì)混合物的配制方法，包括以下步驟：取注射水加入潔凈的燒杯中，依次加入葡聚糖、維生素E醋酸酯、聚醚F-68攪拌均勻；再依次加入棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和膽固醇繼續(xù)攪拌均勻；轉(zhuǎn)移至容量瓶中定容，0.2μm過濾器過濾，得到脂質(zhì)混合物，分裝，置于4℃儲存。

較為優(yōu)化地，一種用于細(xì)胞培養(yǎng)基的脂質(zhì)混合物的應(yīng)用，所述脂質(zhì)混合物用于培養(yǎng)T細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基中。