[發(fā)明專利]一種表達(dá)HPV 35L1的多核苷酸及其表達(dá)載體、宿主細(xì)胞和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110442669.6
• 申請(qǐng)日: 2021-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN113106107A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳佩新;袁靖宇;陸宜;和斐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶博唯佰泰生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/37
• 分類號(hào): C12N15/37;C12N15/81;C12N1/19;C07K14/025;C07K1/22;C07K1/18;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/78
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 朱凌嬌;許亦琳

1.一種用于編碼HPV 35L1蛋白的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQID NO：2所示。

2.一種重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體中含有如權(quán)利要求1所示的多核苷酸。

3.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞中含有或者整合有如權(quán)利要求2所述重組表達(dá)載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為酵母；優(yōu)選的，為甲醇酵母；更優(yōu)選的，為多形漢遜酵母。

5.一種產(chǎn)生HPV 35L1蛋白的方法，包括如下步驟：構(gòu)建整合有或者含有核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的多核苷酸的重組漢遜酵母菌種，培養(yǎng)，收集菌體，破碎菌體獲得裂解液，分離純化裂解液，即可獲得HPV 35L1蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的產(chǎn)生HPV 35L1蛋白的方法，其特征在于，還包括以下特征中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：

1)所述多核苷酸整合于質(zhì)粒中，所述質(zhì)粒整合于重組漢遜酵母菌種基因組中；

2)所述培養(yǎng)的條件包括：pH5.0～7.0，發(fā)酵溫度30～37℃，攪拌轉(zhuǎn)速≦950rpm，空氣流量≦2.0VVM，罐壓≦0.10MPa，溶氧10％以上；

3)將重組漢遜酵母菌種置于含有甘油的培養(yǎng)基中培養(yǎng)；在培養(yǎng)過程中，當(dāng)培養(yǎng)基中的甘油消耗完，菌體濕重大于100g/L時(shí)，開始加甘油，甘油補(bǔ)料速度200～600g/h；當(dāng)菌體濕重大于200g/L時(shí)，開始一次性加入甲醇至0.5％(w/v)，進(jìn)入甲醇誘導(dǎo)期，待甲醇全部消耗且溶氧上升到80％時(shí)，開始流加甲醇，隨著菌體利用甲醇速度加快，逐步調(diào)整甲醇流加速度，誘導(dǎo)過程控制溶氧20％以上，誘導(dǎo)30～50h菌體濕重達(dá)到300～400g/L后發(fā)酵結(jié)束；

4)所述分離純化是指將菌體裂解液先通過陽離子交換層析，再通過CHT層析。

7.一種HPV 35L1蛋白，采用權(quán)利要求5-6任一所述的產(chǎn)生HPV 35L1蛋白的方法獲得。

8.如權(quán)利要求1所述的用于編碼HPV 35L1蛋白的多核苷酸，或權(quán)利要求2所述的重組表達(dá)載體，或權(quán)利要求3所述的宿主細(xì)胞，或權(quán)利要求7所述的HPV 35L1蛋白在制備HPV疫苗中的用途。

9.一種抗HPV疫苗的制備方法，包括以下步驟：利用權(quán)利要求5-6任一所述的產(chǎn)生HPV35L1蛋白的方法，制備HPV 35L1蛋白，加入藥學(xué)上可用的疫苗佐劑。

10.一種抗HPV的疫苗，采用權(quán)利要求9所述的抗HPV疫苗的制備方法獲得。