[發(fā)明專利]一種特異性白念珠真菌熒光染色液及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110442332.5
• 申請日: 2021-04-23
• 公開（公告）號: CN113375998A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇成康;陶成龍
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州浩康生物科技有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N21/64
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

1.一種特異性白念珠真菌熒光染色液，其特征在于，每1L特異性白念珠真菌熒光染色液中含有：粘附肽原液0.05～0.15g、鏈霉親和素-熒光素復(fù)合物0.05～1g、滲透劑5～25g、穩(wěn)定劑30～225g、抗猝滅劑0.5～25g。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性白念珠真菌熒光染色液，其特征在于，所述粘附肽原溶液是由粘附肽粉末和含有二甲基亞砜的磷酸鹽緩沖液配制成的。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性白念珠真菌熒光染色液，其特征在于，所述粘附肽原溶液中粘附肽的濃度為0.5～2mg/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性白念珠真菌熒光染色液，其特征在于，所述鏈霉親和素-熒光素復(fù)合物為采用下述方法制得：

將熒光素溶于硼酸鹽緩沖液A中，再加入碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺，反應(yīng)3～10min，調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0～8.5后加入鏈霉親和素，混勻后持續(xù)反應(yīng)1～3h；向所得的溶液中加入含5％牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液封閉5～20min終止反應(yīng)，經(jīng)離心、除去沉淀后，用硼酸鹽緩沖液B在截留分子量100K的超濾離心管中洗滌得到鏈霉親和素-熒光素復(fù)合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的特異性白念珠真菌熒光染色液，其特征在于，所述熒光素為異硫氰酸熒光素、四甲基羅丹明-異硫氰酸中的至少一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性白念珠真菌熒光染色液，其特征在于，所述滲透劑為二甲基亞砜、二甲基乙酰胺中的至少一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性白念珠真菌熒光染色液，其特征在于，所述穩(wěn)定劑為磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉中的至少一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性白念珠真菌熒光染色液，其特征在于，所述抗淬滅劑為丙三醇、抗壞血酸中的至少一種。

9.一種如權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)所述的特異性白念珠真菌熒光染色液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將粘附肽原液與鏈霉親和素?zé)晒馑貜?fù)合物，在室溫下孵育10～40min，搖晃徹底，并進(jìn)行避光保存，得到復(fù)合物溶液；

(2)將所得的復(fù)合物溶液、穩(wěn)定劑、抗淬滅劑、滲透劑和水混合均勻后，定容至1L即得特異性白念珠真菌熒光染色液。

10.一種特異性白念珠真菌的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將待測的含有微生物的樣本稀釋液移至載玻片中間區(qū)域，制片完成；

(2)將如權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)所述的特異性白念珠真菌熒光染色液滴加到樣本稀釋液進(jìn)行覆蓋，在25～37℃下孵育5～30min即可完成染色；

(3)取蓋玻片直接加蓋染色完成的載玻片，吸取多余液體；

(4)取樣片載玻片于熒光顯微鏡下以400～600nm的波段進(jìn)行觀測白念珠菌群的形態(tài)及熒光強(qiáng)度。