[發(fā)明專(zhuān)利]一種結(jié)核分枝桿菌抗原蛋白R(shí)v1808及其表位肽的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110441055.6
• 申請(qǐng)日: 2021-04-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113173979A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周亮;曾慶
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州好芝生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/35
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/35;G01N33/569;C12Q1/02;A61K39/04;A61P31/06
• 代理公司: 北京市萬(wàn)慧達(dá)律師事務(wù)所 11111
• 代理人: 謝敏楠

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種結(jié)核分枝桿菌抗原蛋白R(shí)v1808及其表位肽的應(yīng)用。由所述Rv1808蛋白及其表位肽制備的檢測(cè)試劑可廣泛用于結(jié)核病的輔助診斷、流行病學(xué)監(jiān)測(cè)等相關(guān)領(lǐng)域，Rv1808蛋白及其表位肽制備的結(jié)核疫苗和抗結(jié)核藥物可用于結(jié)核病的預(yù)防和治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種結(jié)核分枝桿菌抗原蛋白R(shí)v1808及其表位肽的應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)核病(Tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium Tuberculosis，MTB)感染引起的以呼吸道傳染為主的傳染病，是單因致病率最高的慢性傳染性疾病。據(jù)WHO估計(jì)，全世界約有三分之一人口為結(jié)核帶菌者，其中約5-10％的攜帶者可發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病。中國(guó)作為全球結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)之一，肺結(jié)核病人的數(shù)量?jī)H次于印度而位居世界第二。因此，研發(fā)適合中國(guó)人群的結(jié)核病疫苗和新型檢測(cè)方法刻不容緩。

結(jié)核分枝桿菌屬于胞內(nèi)寄生菌，對(duì)其有效控制主要依賴于細(xì)胞免疫，其中CD8⁺細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)在清除結(jié)核菌中發(fā)揮著重要作用。抗原特異性CD8⁺CTL數(shù)量的多少和功能的強(qiáng)弱直接反映了人體特異性細(xì)胞免疫的功能狀態(tài)，在監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)程、指導(dǎo)治療方案、評(píng)價(jià)臨床療效、預(yù)測(cè)疾病慢性轉(zhuǎn)歸以及疫苗效果評(píng)估等方面都有著不同于抗體的重要參考價(jià)值。鑒于CD8⁺T細(xì)胞在抗結(jié)核中發(fā)揮的重要作用，篩選中國(guó)人群高頻HLA分型對(duì)應(yīng)的CTL表位肽及其組合，并定期評(píng)估CTL表位肽刺激機(jī)體產(chǎn)生抗結(jié)核特異性CD8⁺T細(xì)胞的數(shù)目及功能的動(dòng)態(tài)變化，在結(jié)核疫苗研制及后期療效評(píng)估、疾病進(jìn)展檢測(cè)中均具有重要的意義。

目前已知的結(jié)核菌CTL表位肽主要是在歐美人群中鑒定，多為HLA-A*0201限制性，而對(duì)于結(jié)核病流行最嚴(yán)重的非洲和東南亞人群，并沒(méi)有合適的表位肽可使用。HLA-A*2402是世界上分布最廣泛的HLA抗原之一，特別在亞洲人群中；然而，已發(fā)現(xiàn)的HLA-A*2402特異的結(jié)核菌CD8細(xì)胞表位非常少。因此，鑒定HLA-A*2402限制性CTL表位對(duì)于研發(fā)適合中國(guó)人群的表位肽疫苗具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝私Y(jié)核分枝桿菌Rv1808蛋白在制備結(jié)核測(cè)試劑、疫苗和/或藥物中的應(yīng)用。

結(jié)核分枝桿菌RV1808基因編碼的PPE家族蛋白32(PPE32)蛋白屬于PPE_SVP亞家族成員之一。

在一些實(shí)施方案中，所述Rv1808蛋白選自SEQ ID NO：5所示的序列，或?qū)EQ IDNO：5所示的序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的且與SEQID NO：5所示的序列具有相同功能的蛋白質(zhì)。

一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N結(jié)核分枝桿菌的表位肽，所述表位肽選自如SEQ IDNO：1-4任一所示的序列，或?qū)EQ ID NO：1-4任一所示的序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的且與取代和/或缺失和/或添加前的序列具有相同功能的表位肽中的至少一種。

T細(xì)胞無(wú)法識(shí)別完整的結(jié)核菌和蛋白抗原，而是識(shí)別經(jīng)過(guò)抗原遞呈細(xì)胞攝取和加工后釋放出的結(jié)核表位肽。表位肽是抗原中引起免疫應(yīng)答的核心部份，也稱(chēng)為抗原決定簇，它與抗原遞呈細(xì)胞(APC)表面的MHC分子結(jié)合形成肽-MHC復(fù)合物并被遞呈在APC細(xì)胞表面，進(jìn)而活化T細(xì)胞，誘發(fā)T細(xì)胞免疫反應(yīng)。CD4⁺T細(xì)胞識(shí)別MHC-II類(lèi)分子遞呈的表位肽，而CD8⁺T細(xì)胞識(shí)別MHC-I類(lèi)分子遞呈的表位肽。T細(xì)胞對(duì)表位肽的識(shí)別及其活化要求表位肽與抗原遞呈細(xì)胞表面MHC分子穩(wěn)定結(jié)合，而肽與MHC分子的親和力是形成肽-MHC復(fù)合物的關(guān)鍵。

在一些實(shí)施方案中，所述表位肽選自如SEQ ID NO：1所示的序列，或?qū)EQ ID NO：1所示的序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的且與SEQ IDNO：1所示的序列具有相同功能的表位肽。