[發明專利]一種Fmoc-Ile-OH的有關物質檢測方法

有效

• 申請號: 202110439206.4
• 申請日: 2021-04-23
• 公開（公告）號: CN113655131B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發明（設計）人: 朱莉;徐紅巖;閆峰;徐金勇;吳福全
• 申請（專利權）人: 吉爾多肽生物制藥（大連市）有限公司;濱海吉爾多肽有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 常州市權航專利代理有限公司 32280
• 代理人: 黃晶晶

本發明涉及一種Fmoc?Ile?OH的有關物質檢測方法，其特征在于參數條件如下：采用高效液相色譜法進行檢測，檢測波長為210～280nm，所用流動相A為水，流動相B為乙腈，均填加0.05～0.15%TFA的離子對溶液；梯度變化中流動相A的體積含量為52~5~52%，流動相B的體積含量為48~95~48%。本發明方法可以較好的檢測Fmoc?Ile?OH的有關物質，檢測速度較快，結果準確，方法步驟簡單，便于操作。

技術領域

本發明涉及多肽領域，具體涉及一種Fmoc-Ile-OH的有關物質檢測方法。

背景技術

Fmoc-Ile-OH，又名Fmoc-L-異亮氨酸或N-芴甲氧羰基-L-異亮氨酸，其結構如下所示：

Fmoc-Ile-OH是合成多肽的重要原料，其原料藥對雜質鑒定限是小于0.1％，質控限度＜0.15％，控制有關物質限度單雜0.1％的，大大減少藥企的工藝研究和質量研究的時間以及成本，所以Fmoc-Ile-OH的有關物質研究和控制對原料藥和制劑的質量研究都有重要意義。

L-異亮氨酸(L-Isoleucine)是人體必須的八種氨基酸之一，同時又是支鏈氨基酸的一種，因其特殊的結構和功能而占有特別重要的地位，是二十多種藥用氨基酸中最為昂貴的一種，以用量計占第二位，以金額計占第一位，主要用于配制各種復合氨基酸制劑，除營養型氨基酸輸液外，特別應用于高支鏈氨基酸輸液(如3H輸液等)及口服液(如肝安干糖漿等)。L-異亮氨酸具有促進體內蛋白質、酶和肽類激素合成等功能，在肌肉蛋白代謝中尤為重要，主要用于治療神經障礙、食欲減退和貧血等，有增強機體免疫力的功能，是氨基酸輸液、氨基酸口服劑不可缺少的組分，對治療肝昏迷、腎臟病、肌肉萎縮等癥有顯著療效。此外，L-異亮氨酸被廣泛運用于食品工業、化妝品、光化學和電化學等領域。

異亮氨酸(Ile)具有兩個手性中心，存在4種立體異構體：(2S,3S)L-異亮氨酸(L-Ile)、(2R,3R)D-異亮氨酸(D-Ile)、(2S,3R)L-別異亮氨酸(L-allo-Ile)和(2R,3S)D-別異亮氨酸(D-allo-Ile)。亮氨酸與異亮氨酸是結構差異很小的同分異構體氨基酸，結構上亮氨酸與異亮氨酸的碳主鏈相同，前者的γ位有個甲基，后者β位有個甲基。因此Fmoc-Ile-OH的有關物質之一Fmoc-Leu-OH分離難度尤其大。4種立體異構體的結構式如下所示：

公開號為CN104345114A的中國專利公開了一種反相分離衍生化亮氨酸和異亮氨酸的方法，雖然樣品能夠分離，但Fmoc-Leu-OH與Fmoc-Ile-OH出峰時間均在40分鐘左右，色譜分析時間長，且分離度小于1.5。因此，目前亟需一種檢測時間較短，對相關物質分離度較好的Fmoc-Ile-OH的有關物質檢測方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提供一種操作快捷、對相關物質分離度好的Fmoc-Ile-OH的有關物質檢測方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種Fmoc-Ile-OH的有關物質檢測方法，其特征在于參數條件如下：

采用高效液相色譜法進行檢測，檢測波長為210～280nm，所用流動相A為水，流動相B為乙腈，均添加0.05～0.15％TFA的離子對溶液；梯度變化中流動相A的體積含量為52～5～52％，流動相B的體積含量為48～95～48％。

優選的，所述有關物質檢測方法中色譜柱可以選自C₄色譜柱。

優選的，所述有關物質檢測方法中柱溫為25～40℃，流動相流速優選為0.5～1.2ml/min。

優選的，所述有關物質檢測方法中柱溫為40℃，流動相流速為0.8ml/min。