[發明專利]FSTL1在肝臟等組織抗纖維化的穩態調節中的保護作用與應用

在審

• 申請號: 202110433648.8
• 申請日: 2016-02-05
• 公開（公告）號: CN113106122A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 何玉龍;蔣海娟;張祿卿
• 申請（專利權）人: 何玉龍
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/16;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 北京安杰律師事務所 11627
• 代理人: 吳立;楊劍

1.一種制備與組織纖維化密切相關的血管內皮細胞FSTL1基因敲除非人動物模型及其后代的方法，其中，該方法的具體制備步驟為：

利用Cre-LoxP系統，獲得FSTL1條件性敲除模型Fstl1^Flox/Flox非人動物；同時利用Fstl1^+/-非人動物與Tek-cre非人動物交配得到Fstl1^+/-，Tek-cre的非人動物，再用所述Fstl1^+/-，Tek-cre非人動物與Fstl1^Flox/Flox非人動物交配得到Fstl1^Flox/-，Tek-cre血管內皮細胞敲除FSTL1的非人動物模型，即Fstl1^-/ECKO，

其中，所述組織選自肺、肝臟、和腎臟中的至少一種，所述非人動物模型可用于模擬肺組織纖維化疾病、肝組織纖維化疾病、腎臟組織纖維化疾病、和右心室擴張病變中的至少一種。

2.一種制備與組織纖維化密切相關的全身性或血管內皮細胞誘導性敲除FSTL1基因的非人動物模型及其后代的方法，其中，該方法的具體制備步驟為：

i)將Fstl1^+/-非人動物與表達UBC-Cre/ERT2或VE-Cadherin-Cre/ERT2的轉基因非人動物交配得到Fstl1^+/-；Cre/ERT2非人動物；

ii)再用所述Fstl1^+/-；Cre/ERT2非人動物與Fstl1^Flox/Flox非人動物交配分別得到基因型為Fstl1^Flox/-；UBC-Cre/ERT2或Fstl1^Flox/-；VE-Cadherin-Cre/ERT2、以及Fstl1^Flox/+；UBC-Cre/ERT2或Fstl1^Flox/+；VE-Cadherin-Cre/ERT2的非人動物模型，

其中，所述組織選自肺、肝臟、和腎臟中的至少一種，所述非人動物模型可用于模擬肺組織纖維化疾病、肝組織纖維化疾病、腎臟組織纖維化疾病、和右心室擴張病變中的至少一種。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述右心室擴張病變選自肺動脈高壓及其他肺源性高血壓、右心室或左心室心肌癥、右心室缺血或梗死、肺動脈瓣和三尖瓣病變的至少一種。

4.如權利要求1或2所述方法，其中所述非人動物為哺乳動物。

5.如權利要求4所述方法，其中所述哺乳動物為嚙齒類動物。

6.如權利要求5所述方法，其中所述嚙齒類動物為小鼠。

7.如權利要求2所述的方法，進步一包括步驟

iii)在非人動物出生1-8天或2周至成年，使用不同劑量的基因敲除誘導劑誘導非人動物，使得非人動物受外源啟動子控制地進行FSTL1等位基因的條件性敲除，制備嚴重組織纖維化病變的模型或較輕組織纖維化病變的模型。

8.如權利要求7所述的方法，其中所述基因敲除誘導劑包括四環素、干擾素、激素。

9.如權利要求8所述方法，其中所述激素為他莫昔酚。

10.如權利要求9所述的方法，其中在步驟iii)中，在出生后1-4天，使用劑量為50-70μg/天的他莫昔酚誘導。

11.如權利要求9所述的方法，其中在步驟iii)中，在出生后5-8天，使用劑量為90-100μg/天的他莫昔酚誘導。

12.如權利要求9所述的方法，其中在步驟iii)中，在出生后2周到成年，使用劑量為500-1000μg/天的他莫昔酚誘導。