[發(fā)明專利]流感核蛋白疫苗

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110430609.2
• 申請日: 2014-03-18
• 公開（公告）號: CN113307881A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: J·德爾坎波阿斯卡拉泰爾;F·希爾
• 申請（專利權(quán)）人: 奧西瓦科斯公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;A61K39/145;A61K39/385;A61P31/16
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 封新琴

本發(fā)明涉及一種融合蛋白，其包含來自流感病毒株A、B或C的核蛋白抗原的變體和C4bp寡聚化域的變體，用于增加來自流感的核蛋白抗原的細胞免疫原性。本發(fā)明還涉及核酸、載體、融合蛋白和免疫原性組合物，它們用作疫苗或免疫療法用于預(yù)防和治療流感疾病。

本申請是申請日為2014年3月18日，申請?zhí)枮?01480013364.1，發(fā)明名稱為流感核蛋白疫苗的專利申請的分案申請。

背景

存在改進流感疫苗的需要。目前針對流感的疫苗策略集中在生成針對血凝素的穩(wěn)固的抗體(體液的)反應(yīng)。由于在一年的過程中循環(huán)流感病毒株中高度的抗原性漂移，對于每個流感季必須特定地重新配制疫苗株。雖然年度(或季度)流感疫苗對于不同年齡類別的變化程度是成功的，顯然對于年幼和年老者特別需要更有效的保護。此外，存在再造病毒會進化的重大、永久的風(fēng)險，其在稱為“抗原性漂移”的過程中獲得非常不同的HA(血凝素)基因。這會產(chǎn)生公共健康緊急情況，因為目前的流感疫苗基本上依賴于HA抗原。

流感病毒是病毒的正粘病毒科(Orthomyxoviridae)中一種有包膜的、單鏈、負鏈RNA病毒，分為3個主要類型A、B和C。流感A病毒感染多種多樣的動物，包括人、鳥類、豬、馬、蝙蝠等等，盡管任何特定的流感病毒的趨向性通常高度適應(yīng)于特定宿主。流感B病毒感染較小數(shù)目的物種，即人和海豹，但仍然是年度流行性感冒的重要原因。大多數(shù)人流感感染是通過流感病毒A或B引起的；而感染人和豬的流感C病毒罕見導(dǎo)致嚴重的人感染或流行(Lamb)。

目前失活的流感病毒疫苗誘導(dǎo)抵御緊密相關(guān)的病毒株的抗體。目前得到許可的疫苗主要誘導(dǎo)針對血凝素(HA)的菌株-特異性的中和抗體，病毒表面上的主要抗原性決定簇其為高免疫原性的，并可預(yù)防由匹配病毒株的感染引起的疾病。然而，HA具有重要的抗原變異，其排除其單獨用于經(jīng)設(shè)計以提供光譜防護(broad protection)的疫苗。為此，針對較少可變的靶物生成保護反應(yīng)的可替換的疫苗策略是非常感興趣的。

用流感A病毒的天然感染誘導(dǎo)體液和細胞免疫性兩者。持久的細胞免疫性主要針對保守的、內(nèi)部病毒蛋白，如核蛋白(NP)。在天然感染后NP抗原在人中是免疫原性的，但誘導(dǎo)的細胞毒性T淋巴細胞具有短的壽命(McMichael a,McMichael b)。

針對NP的細胞免疫性是有價值的，因為其針對NP表位的不同變體，且靶向NP的DNA疫苗在動物中具有誘導(dǎo)的交叉-保護的免疫性(Schotsaert)。

核蛋白(NP)抗原已長期被識別為高度保守的抗原：甚至是最歧化的(divergent)流感病毒A株在它們編碼的NP蛋白中共享90％同一性(Gorman,Xu)。對NP的抗原性變化是罕見的且僅僅在較小程度發(fā)生(Staneková)。

現(xiàn)有技術(shù)

使用核蛋白作為疫苗中的抗原

流感核蛋白用作抗原描述于1980年代(Wraith)。小鼠中針對NP的細胞免疫響應(yīng)能夠誘導(dǎo)免疫性，且能夠顯著地產(chǎn)生針對分歧的A型病毒的交叉保護。顯示用由H3N2病毒純化的NP免疫小鼠可提供免于致死性異源(H1N1)攻擊的實質(zhì)保護(75％)，但它不能防止感染。

使用NP基因的DNA疫苗已知20年：將它們用于第一“概念證明”實驗用于DNA免疫本身(Ulmer)。

NP從病毒載體的表達首次在1980年代證明(Yewdell 1985)，且用此載體免疫與細胞毒性T淋巴細胞針對分歧的流感病毒A株而非B株與DNA疫苗相比改進的生成相關(guān)。

自此，已顯示用表達PR8核蛋白的MVA載體免疫小鼠保護它們抵御異亞型流感病毒(Altstein)的低劑量攻擊。更近些，已將一種編碼融合于M1蛋白的NP蛋白的病毒載體用于免疫人(Lillie,Berthoud,Antrobus)。這些研究顯著地顯示：當體液反應(yīng)通過免疫衰老(immunosenescence)下降時，對于NP的細胞免疫響應(yīng)可在較年長的人中被實質(zhì)地增強(Antrobus)。