[發明專利]用于長白山中華蜜蜂品種鑒定的SNP標記及鑒定方法

有效

• 申請號: 202110429315.8
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113186297B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 劉楠楠;牛慶生;李興安;李杰鑾;常志光;曹軼杰;宋延明;何金明
• 申請（專利權）人: 吉林省養蜂科學研究所（吉林省蜂產品質量管理監督站;吉林省蜜蜂遺傳資源基因保護中心）
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;G16B20/20;G16B20/30;G16B30/00
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理有限公司 11562
• 代理人: 張雪

本發明公開了一種用于長白山中華蜜蜂品種鑒定的SNP標記及鑒定方法，屬于蜜蜂鑒定技術領域。本發明公開了22個長白山中華蜜蜂特異性SNP位點，以特異性SNP標記鑒定為主，幾何形態測量學特征鑒定為補充，建立了一種應用22個SNP位點和5個翅形態學特征的鑒定長白山中華蜜蜂生態型蜂種的方法。本發明公開的SNP標記和鑒定方法可用于長白山中華蜜蜂種質資源遺傳多樣性分析、長白山中華蜜蜂分子標記輔助育種和蜂種純度鑒定、與中國中華蜜蜂其他地理生態型的遺傳分化、對本地環境的適應性進化以及瀕危長白山中華蜜蜂種質資源的保護具有重要理論與應用價值，對更加深入的保護長白山中華蜜蜂種群具有重要意義。

技術領域

本發明涉及蜜蜂鑒定技術領域，特別是涉及用于長白山中華蜜蜂品種鑒定的SNP標記及鑒定方法。

背景技術

長白山中華蜜蜂是長白山地區特有的蜜蜂品種，長期以來在長白山區特定的氣候、蜜源條件下形成了繁育快、維持強群、采集力強、抗逆性強、性情溫順、抗寒等優良性狀，極具保護和開發價值。且長白山中華蜜蜂是長白山植物區系唯一的中華蜜蜂生態型，在維持和豐富陸地生態系統生物多樣性以及提供授粉和其他有價值的生態系統服務等方面的作用十分巨大。然而，長白山中華蜜蜂的群體數量和分布密度呈現出惡性態勢。受物種生態入侵、大面積野生動植物棲息地日趨喪失、生物資源過度開發、農業集約化發展、病原微生物感染與擴展、殺蟲劑過度使用和濫用以及全球氣候變暖和大氣污染等生物和非生物因子的影響，種群健康受到脅迫，目前種群數量已不足1萬群，處于瀕危-維持狀態，對蜂種種質資源的保護、鑒定、評價工作迫在眉睫。

目前，中華蜜蜂生態型的鑒定技術，在外部形態層面主要依據形態學差異及其地理分布鑒定，在分子層面主要依據線粒體或微衛星等二代分子標記技術鑒定。基于外部形態的中華蜜蜂蜂種鑒定常利用傳統的形態鑒定方法進行鑒定，具體指標包括吻長、右前翅長、右前翅寬等二十余項指標，因而傳統形態學鑒定存在操作形態指標較多、步驟繁瑣、人為誤差大的技術缺陷，且僅通過傳統形態學方法無法準確進行中華蜜蜂種質資源的鑒定和純度分析；基于二代分子標記技術的中華蜜蜂蜂種鑒定，通常采用mtDNA或微衛星標記，當研究目的是制定保種計劃和策略或種質資源鑒定等這些對遺傳信息準確性要求比較高的研究時，并不能非常準確的評估。

隨著第三代分子標記技術SNP標記的發展和基因分型技術的提高，越來越多的瀕危種質資源采用SNP標記用于種質鑒定和識別。三代SNP標記技術具有覆蓋基因組范圍廣、SNP標記數目多、不受環境因素影響、變異豐富等優點，能直接反應樣品基因水平的差異，基于高密度的SNP標記信息保證了蜂種鑒定的可靠性和準確性。但現有技術中尚缺少能夠用于鑒別長白山中華蜜蜂的SNP標記及具體鑒定方法。

發明內容

本發明的目的是提供用于長白山中華蜜蜂品種鑒定的SNP標記及鑒定方法，以解決上述現有技術存在的問題，通過檢測長白山中華蜜蜂特有的SNP標記并結合形態學鑒定，實現了長白山中華蜜蜂品種的快速準確鑒別。

為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：

技術方案之一，提供了一組用于長白山中華蜜蜂品種鑒別的SNP標記，所述的SNP分子標記包括如下所示的22個SNP分子標記：

技術方案之二，提供了一種鑒定長白山中華蜜蜂的方法，所述方法包括以下步驟：

1)提取待測蜜蜂品種的DNA，擴增；

2)對步驟1)獲得的擴增產物進行單核苷酸多態性檢測并與所述的22個SNP位點進行比較，若所述待測蜜蜂品種滿足22個SNP位點中的至少21個，則所述待測蜜蜂樣品為長白山中華蜜蜂；若所述待測蜜蜂樣品滿足SNP位點個數為18個或18個以下，則所述待測蜜蜂樣品不是長白山中華蜜蜂；若所述待測蜜蜂樣品滿足SNP位點個數為19個或20個，則所述待測蜜蜂樣品為待定組蜜蜂，進行形態學補充鑒定；