[發(fā)明專利]一種真菌細(xì)胞陽性蠟塊及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110427984.1
• 申請日: 2021-04-21
• 公開（公告）號: CN113358447A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鐘學(xué)軍;黎鋒;江耿躍;孫成剛;張杰;劉柱新;郭建榮
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心有限公司
• 主分類號: G01N1/31
• 分類號: G01N1/31;G01N1/36;G01N1/28;G01N21/84;G01N21/01
• 代理公司: 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44100
• 代理人: 李海恬

本發(fā)明涉及一種真菌細(xì)胞陽性蠟塊及其制備方法和應(yīng)用。所述制備方法，包括培養(yǎng)真菌，將真菌加入液態(tài)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待真菌細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到預(yù)定數(shù)量后，加入固定劑進行固定并滅活；制作真菌細(xì)胞陽性蠟塊，在滅活后的溶液中加入對比細(xì)胞，混勻后離心，除去上清液得到沉淀物，加入液態(tài)瓊脂，混勻后冷卻凝固，加入固定劑進行固定，脫水、包埋，即得。液態(tài)培養(yǎng)基既能給真菌提供營養(yǎng)，又為后續(xù)使用瓊脂作為介質(zhì)制作細(xì)胞蠟塊提供了便捷條件；加入對比細(xì)胞能使真菌散落在細(xì)胞和細(xì)胞團之中，在顯微鏡下觀察真菌效果與檢測組織更為接近，同時對比細(xì)胞可作為真菌染色的背景襯染，使真菌與背景對比清晰，更容易觀察，制作方法簡單容易操作，實用性強。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及病理學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種真菌細(xì)胞陽性蠟塊及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

真菌也稱霉菌，廣泛存在于自然界，大部分為非致病性，少數(shù)可感染人體形成真菌病。在臨床病理診斷中，如能證實真菌感染，可為臨床醫(yī)生對患者進行抗感染治療提供依據(jù)。在HE切片上不容易觀察到組織細(xì)胞內(nèi)的真菌，通過特殊染色可以很好的顯示出真菌，為真菌感染的病理診斷提供證據(jù)。

在真菌特殊染色中，如果未設(shè)置陽性對照并且檢測的組織片是陰性，就很難判斷是組織本身沒有真菌感染還是染色操作不成功。因此，在特殊染色中，陽性對照的設(shè)立是一個十分重要的質(zhì)控措施，通常的做法是在每一張待染色片中設(shè)置一個已知陽性的組織作為對照，以保證染色結(jié)果的可靠性，同時為病理醫(yī)生判斷組織細(xì)胞是否有真菌提供對照參考。但在日常工作中，由于真菌的陽性標(biāo)本不多見或已有陽性組織太小難以留存等原因，陽性對照組織不容易獲得，所以染色操作時設(shè)立陽性對照較為困難。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述問題，本發(fā)明提供一種真菌細(xì)胞陽性蠟塊的制備方法，制備得到的真菌細(xì)胞陽性蠟塊接近真實的真菌感染組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)，用于陽性對照試驗觀察更真實，有效地保證真菌陽性片的來源，彌補了不便從日常組織樣本中存留和獲取陽性對照標(biāo)本的缺點,便于進行染色質(zhì)量控制，從而保證染色質(zhì)量。

為了達(dá)到上述目的，采用了一種真菌細(xì)胞陽性蠟塊的制備方法，包括以下步驟：

培養(yǎng)真菌：將真菌加入液態(tài)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待真菌細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到預(yù)定數(shù)量后，加入固定劑進行固定并滅活；

制作真菌細(xì)胞陽性蠟塊：在滅活后的溶液中加入對比細(xì)胞，混勻后離心，除去上清液得到沉淀物，加入液態(tài)瓊脂，混勻后冷卻凝固，加入固定劑進行固定，脫水、包埋，即得。

上述制備方法中，液態(tài)培養(yǎng)基能給真菌提供營養(yǎng)，且為后續(xù)使用瓊脂作為介質(zhì)制作細(xì)胞蠟塊提供了便捷條件；加入對比細(xì)胞能使真菌散落在細(xì)胞和細(xì)胞團之中，在顯微鏡下觀察真菌效果與檢測組織更為接近，同時對比細(xì)胞可作為真菌染色的背景襯染，使真菌與背景對比清晰，制備得到的真菌細(xì)胞陽性蠟塊接近真實的真菌感染組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)，用于陽性對照試驗觀察更真實，更容易觀察，制作方法簡單容易操作，實用性強。

在其中一個實施例中，所述液態(tài)培養(yǎng)基為淀粉酶溶液，濃度為1wt％-5wt％。使用上述濃度的淀粉酶溶液在適宜的溫度條件下非常適合真菌生長，作為培養(yǎng)基培養(yǎng)真菌，不僅原料容易獲取，且培養(yǎng)條件也容易達(dá)到，操作簡便，效果好。

在其中一個實施例中，所述淀粉酶溶液中的淀粉酶為α-淀粉酶。所述α-淀粉酶溶液易于獲取，且能滿足真菌生長的營養(yǎng)需求。

在其中一個實施例中，所述真菌細(xì)胞和所述對比細(xì)胞的濃度比為1:1-2，所述液態(tài)瓊脂和沉淀物的體積比為1:0.5-1.5。在上述條件下，真菌細(xì)胞和對比細(xì)胞的參照對比更清晰明顯，更容易觀察。

在其中一個實施例中，所述對比細(xì)胞為胸腹水沉淀細(xì)胞。所述胸腹水沉淀細(xì)胞常見易得，且細(xì)胞含量豐富，將真菌混雜在這些脫落細(xì)胞中，所制作出來的真菌陽性蠟塊，較接近真實的真菌感染的組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)，用于陽性對照實驗觀察更真實。