[發明專利]一種脂聯素的膠乳增強免疫比濁試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 202110426188.6
• 申請日: 2021-04-20
• 公開（公告）號: CN113075415A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 顧金華;梁佳然
• 申請（專利權）人: 蘇州優諾康生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/546;G01N33/531
• 代理公司: 北京盛凡佳華專利代理事務所(普通合伙) 11947
• 代理人: 王翠

本發明提供的一種脂聯素的膠乳增強免疫比濁試劑盒及制備方法。其包括R1試劑、R2試劑、脂聯素質控品、脂聯素校準品，其中：所述R1試劑包括緩沖液、電解質、穩定劑、表面活性劑、防腐劑；所述的R2試劑包括偶聯有脂聯素抗體的膠乳微球、緩沖液、穩定劑、電解質、防腐劑，所述膠乳微球是含有聚苯乙烯的多聚物，表面含有羧基基團，粒徑在70?200nm之間；所述的脂聯素質控品包括脂聯素和質控品稀釋液；所述的脂聯素校準品包括脂聯素和校準品稀釋液。本發明具有檢測簡單、靈敏度高、線性范圍寬的特點。

技術領域

本發明提供的一種脂聯素的膠乳增強免疫比濁試劑盒及制備方法。

背景技術

脂聯素(Adiponectin，APN)亦稱Acrp30、GBP28或AdipoQ，是一種由脂肪細胞合成和分泌細胞因子，能在人體血漿中穩定存在，濃度范圍約為3.0-30.0mg/L，約占血漿蛋白的0.01％。人類脂聯素含244個氨基酸，包括3個區域：氨基末端信號序列、膠原結構域和羧基末端的球形結構域。脂聯素以三聚體(65kb)、六聚體(150kb)和高分子量聚合體(18-36 個多體，280kb)三種亞型存在于血液中。臨床研究顯示，脂聯素與肥胖、II型糖尿病、冠心病、胰島素抵抗密切相關，具有抗動脈粥樣硬化形成、抗炎癥和血管損傷后抗內膜增生的特性。

脂聯素的測定方法有多種，例如放射免疫法(RIA)、酶聯免疫吸附法(ELISA)(人脂聯素ELISA試劑盒，CN102517256A)。ELISA方法雖然在臨床上使用了近二十年，但它依然存在一些致命缺點，操作時間長、自動化程度低。放射免疫法(RIA)靈敏度高，但不穩定，重復性比ELISA差，而且存在放射性污染的危險。

發明內容

本發明提供的一種脂聯素的膠乳增強免疫比濁試劑盒及制備方法，具有檢測簡單、靈敏度高、線性范圍寬的特點。

本發明提供的一種脂聯素的膠乳增強免疫比濁試劑盒及制備方法，包括R1試劑、R2試劑、脂聯素質控品、脂聯素校準品，其中：

所述R1試劑包括緩沖液、電解質、穩定劑、表面活性劑、防腐劑；

所述的R2試劑包括偶聯有脂聯素抗體的膠乳微球、緩沖液、穩定劑、電解質、防腐劑；

所述膠乳微球是含有聚苯乙烯的多聚物，表面含有羧基基團，粒徑在70-200nm之間；

所述的脂聯素質控品包括脂聯素和質控品稀釋液；

所述的脂聯素校準品包括脂聯素和校準品稀釋液。

所述脂聯素抗體通過化學交聯的方法與6-氨基己酸柔性“手臂”鏈偶聯到膠乳微球表面，所述化學交聯的方法是通過化學交聯劑在交聯緩沖液中進行，所述化學交聯劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基硫代琥珀酰亞胺、碳化亞胺、酰肼、異氰酸鉀一種或兩種以上的混合物，所述交聯緩沖液選自不含氨基的緩沖液，為2-(N- 嗎啉代)乙磺酸MES、PB、HEPES、MOPSO緩沖液其中的一種，pH在6.0-8.0。

所述脂聯素校準品是高濃度單點校準品，或者用校準品稀釋液梯度稀釋，直接制備出不同濃度的校準品，濃度為0-200mg/L。

所述脂聯素質控品是高濃度單點質控品，或者用質控品稀釋液梯度稀釋，直接制備出不同濃度的質控品，濃度為10-100mg/L。

所述電解質選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鎂中一種或兩種以上的混合物，濃度在 0.5％-5％之間。

所述穩定劑選自酪蛋白、甘露醇、殼聚糖、牛血清白蛋白中一種或兩種以上的混合物，濃度在1‰-5‰。

所述表面活性劑選自吐溫、脂肪醇聚乙二醇醚、辛基苯基聚氧乙烯醚中一種或兩種以上的混合物，濃度在0.5‰-3‰。