[發明專利]一種用于冷凍電鏡制樣的低共熔溶劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202110425865.2
• 申請日: 2021-04-20
• 公開（公告）號: CN113125482A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 王宏鵬;陶亞晨;楊健;黃俊;呂常江;曹佳仁
• 申請（專利權）人: 浙江科技學院;中國中醫科學院中藥研究所
• 主分類號: G01N23/2202
• 分類號: G01N23/2202;G01N1/38
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 劉慧

本發明公開了一種用于冷凍電鏡制樣的低共熔溶劑及其制備方法，具體涉及冷凍電鏡制樣領域，該低共熔溶劑包括氫鍵供體試劑和氫鍵受體試劑。氫鍵供體試劑選自多元醇、糖、有機酸及有機胺類化合物中的一種，或是它們的混合物。氫鍵受體試劑選自氫鍵受體試劑選自氯化膽堿、甜菜堿、L?脯氨酸類中的至少一種。氫鍵供體試劑和氫鍵受體試劑的摩爾比為1～2:2～4。通過使用上述低共熔溶劑解決了冷凍電鏡制樣時由于底物水溶性不好而造成結果背景不清晰的問題，并且提高了糖苷轉移酶的催化活性、熱穩定性、保存時間等酶活性質。

技術領域

本發明涉及冷凍電鏡制樣領域，具體為一種用于冷凍電鏡制樣的低共熔溶劑及其制備方法。

背景技術

冷凍電鏡技術是結構生物學領域重要的技術，它通常用于大分子量的、難以結晶的生物分子結構的解析。隨著冷凍電鏡技術的發展，已經可以解析原子級分辨率，逐漸成為一種與X-射線晶體學技術互補的生物大分子結構解析技術。尤其適于解析大分子之間或與小分子互作機理。

糖苷轉移酶是一類在生物體內將UDP-葡萄糖等具有催化活化的糖連接到不同受體分子的酶，糖基化的產物具有很多生物學功能。天然藥用活性物中的非極性化合物黃酮、聯苯等類型化合物可以通過糖基化改變其極性實現極性翻轉，進而促進其在生物體內的吸收與運輸，提高其生物活性。

在研究糖苷轉移酶的催化機理過程中，將使用冷凍電鏡對其結構進行研究，但冷凍電鏡的制樣通常在水為主體的緩沖溶液環境中進行，易出現非極性底物溶解性不好而析出的問題，進而阻礙酶促反應的進行。

發明內容

有鑒于此，在冷凍電鏡制備樣品的過程中，通過使用上述低共熔溶劑解決了冷凍電鏡制樣時由于底物水溶性不好而造成結果背景不清晰的問題，并且提高了糖苷轉移酶的催化活性、熱穩定性、保存時間等酶活性質。本發明的DES-緩沖溶劑制作簡單、反應條件溫和、無毒、可降解，符合綠色化學的發展，具有廣泛的工業生產前景。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種用于冷凍電鏡制樣的低共熔溶劑，該低共熔溶劑包括氫鍵供體試劑和氫鍵受體試劑。

氫鍵供體試劑選自多元醇、糖、有機酸及有機胺類化合物中的一種，或是它們的混合物。

氫鍵受體試劑選自氫鍵受體試劑選自氯化膽堿、甜菜堿、L-脯氨酸類中的至少一種。

氫鍵供體試劑和氫鍵受體試劑的摩爾比為1～2:2～4。

作為優選，所述氫鍵供體試劑選自丙二醇、1,2-丙二醇、葡萄糖、馬來酸以及尿素中的一種，或是它們的混合物。

作為優選，所述氫鍵受體試劑為氯化膽堿、甜菜堿、L-脯氨酸中的至少一種。

作為優選，氫鍵供體試劑選自1,2-丙二醇。

作為優選，氫鍵供體試劑與氫鍵受體試劑的摩爾比為1:2。

一種低共熔溶劑的制備方法，該制備方法包括如下步驟：

S01、將氫鍵受體試劑和氫鍵供體試劑按照預設摩爾比，混合加入到燒瓶中。

S02、在燒瓶中加入攪拌子，用磁力攪拌器攪拌混合物，溫度為70-80℃，加熱2h～10h，直到形成無色透明液體，待冷卻至室溫后，將無色透明液體存放在硅膠干燥器中，干燥時間為14d。

作為優選，在步驟S02中，反應溫度為75℃。

作為優選，在步驟S02中，加熱時間為6h。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：