[發明專利]一種遞送蛋白藥物的骨靶向MOFs納米遞藥載體的制備方法

在審

• 申請號: 202110425864.8
• 申請日: 2021-04-20
• 公開（公告）號: CN113171465A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 牛一民;劉陽;張志珺
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: A61K47/36
• 分類號: A61K47/36;A61K47/24;A61K47/06;A61P35/04
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 張恩慧

1.一種遞送蛋白藥物的骨靶向MOFs納米遞藥載體的制備方法，其特征在于，通過以MOFs材料為載體，以ALN為骨靶向配體，以HA為主動靶向配體，包載蛋白質藥物，構筑一種遞送蛋白質藥物的骨靶向MOFs納米載體。

2.根據權利要求書1所述的一種遞送蛋白藥物的骨靶向MOFs納米遞藥載體的制備方法，其特征在于，所述MOFs納米粒包括MOF納米粒、MOF-Cyt C納米粒、HA@MOF-Cyt C納米粒和ALN-HA@MOF-Cyt C納米粒。

3.根據權利要求書2所述的一種遞送蛋白藥物的骨靶向MOFs納米遞藥載體的制備方法，其特征在于，所述制備方法的操作步驟包括：

S1、通過酰胺化反應制備骨靶向聚合物ALN-PEG-HA和非骨靶向聚合物CH3O-PEG-HA；

S2、一鍋法制備MOFs納米粒

利用HA所帶有的-COOH與Zn²⁺通過靜電結合以及配位作用的方式包裹在MOFs納米粒的表面，制備出HA@MOF-Cyt C納米粒和ALN-HA@Cyt C納米粒；

S3、優化MOFs納米粒的制備條件

設置制備液的不同濃度梯度，通過實驗對比，篩選出MOFs納米粒的最佳制備條件；

S4、觀測記錄并對納米粒的包封率和載藥量進行測定

S5、不同MOFs納米粒的體外骨靶向性研究

S51、MOFs納米粒表面包裹發光材料，用于追蹤；

S52、采用離體骨片吸附實驗考查MOFs納米粒的體外骨靶向性能；

S6、MOFs相關納米粒的組織相容性考察

以A549細胞為模型，將MOF、HA@MOF和ALN-HA@MOF與A549細胞共孵育48h，進行相容性考察；

S7、MOFs納米粒體外藥效學研究

取A549細胞孵育培養，吸取培養液，加入不同濃度的Cyt C,MOF-Cyt C、HA@MOF-Cyt C和ALN-HA@MOF-Cyt C溶液，設置純培養液組為陰性對照組，無細胞組為空白對照組，檢測并計算細胞存活率；

S8、A549細胞對MOFs納米粒攝取的觀察

觀察培養瓶中的A549細胞狀態；

對培養瓶中的細胞清洗、消化、吹打制成單細胞懸液；

給藥前觀察、洗滌和預處理；

加入FITC-BSA、MOF-FITC-BSA、HA@MOF-FITC-BSA和ALN-HA@MOF-FITC-BSA溶液孵育；

固定清洗細胞，加入Hoechst染細胞核，顯微鏡觀察。

4.根據權利要求書3所述的一種遞送蛋白藥物的骨靶向MOFs納米遞藥載體的制備方法，其特征在于，所述ALN-PEG-HA的制備包括以下步驟：

S11、ALN在弱堿性的條件下與COOH-PEG-NH2反應生成ALN-PEG-NH2；

S12、將步驟S11的產物ALN-PEG-NH2中的氨基與HA中的羧基發生酰胺化反應生成ALN-PEG-HA。

5.根據權利要求書3所述的一種遞送蛋白藥物的骨靶向MOFs納米遞藥載體的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中MOFs納米粒的最佳制備條件為：有機配體的濃度為1.5-5.5mM、蛋白濃度為0.05-0.5mg/mL和HA濃度為0.1-0.5mg/mL。

6.根據權利要求書3所述的一種遞送蛋白藥物的骨靶向MOFs納米遞藥載體的制備方法，其特征在于，所述MOF納米粒呈現類六邊形的形貌，MOF-Cyt C納米粒呈現類多邊形的形貌，以ALN-HA@MOF-Cyt C為代表的經HA修飾的納米粒呈現出不規則球形的形貌，TEM粒徑均小于100nm。

7.根據權利要求書3所述的一種遞送蛋白藥物的骨靶向MOFs納米遞藥載體的制備方法，其特征在于，所述步驟S6中MOFs材料的體外生物相容性考察采用MT法。

8.根據權利要求書3所述的一種遞送蛋白藥物的骨靶向MOFs納米遞藥載體的制備方法，其特征在于，所述步驟S7中MOFs納米粒體外藥效學研究采用MTT法。