[發明專利]一種培養人參干細胞的方法

有效

• 申請號: 202110424807.8
• 申請日: 2021-04-20
• 公開（公告）號: CN113046295B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 高秀君;劉冰;張明臣;閆培生
• 申請（專利權）人: 山東安然納米實業發展有限公司
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223
• 代理人: 李達寬

1.一種培養人參干細胞的方法，其特征在于，包括：

(1) 將成熟人參清洗消毒，切片，接種到不定根誘導培養基中誘導出人參不定根；將獲得的人參不定根再次接種到不定根誘導培養基中繼代培養擴繁；然后將擴繁獲得的人參不定根接種到液體培養基中培養獲得人參不定根；所述不定根誘導培養基包括1-6mg/L萘乙酸，0.1-0.6mg/L激動素，0.2-1mg/L赤霉素，0.075-1.5g/L檸檬酸，0.03-1g/L抗壞血酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝膠，1-4g/L B5培養基和1-2.4g/L WPM培養基；

(2) 將步驟(1)制得的人參不定根取根尖部分，置于滲透劑溶液中處理；

(3) 將步驟(2)經滲透劑溶液處理的人參不定根根尖置于干細胞誘導培養基中培養，然后轉入擴繁培養基中培養，獲得人參干細胞；所述干細胞誘導培養基包括0.6-1mg/L激動素，2-4 mg/L吲哚乙酸，0.5-1.5mg/L萘乙酸，25-100mg/L抗壞血酸，50-150mg/L檸檬酸，20-60g/L 蔗糖，1-6g/L植物凝膠，1-2.4g/L 1/2MS培養基，0.6-1.4 g/L WPM培養基；

所述擴繁培養基包括2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L萘乙酸，0.8-1.2mg/L激動素，20-60g/L 蔗糖，3g/L植物凝膠，1-2.4g/L 1/2MS培養基和0.6-1.4 g/L WPM培養基；

(4) 將步驟(3)獲得的人參干細胞轉入干細胞液體培養基，暗培養獲得人參干細胞；

干細胞液體培養基包括2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L赤霉素，0.8-1.2mg/L激動素，20-60g/L 蔗糖，1-2.4g/L 1/2MS培養基和0.6-1.4 g/L WPM培養基；

所述步驟(1)中所使用的液體培養基包括：10-55g/L蔗糖，0.8-1.5g/L WPM培養基，0.6-1.6g/L N6培養基，1-6 mg/L 萘乙酸，0.2-1.2 mg/L 激動素，0.2-1.8 mg/L吲哚丁酸。

2.根據權利要求1所述培養人參干細胞的方法，其特征在于，步驟(1)所述液體培養基包括：35g/L蔗糖，1.35g/L WPM培養基，1g/L N6培養基，1-5 mg/L 萘乙酸，0.2-1 mg/L 激動素，0.2-1.8 mg/L吲哚丁酸。

3.根據權利要求2所述培養人參干細胞的方法，其特征在于，步驟(1)所述液體培養基包括：35g/L蔗糖，1.35g/L WPM培養基，1g/L N6培養基，5 mg/L 萘乙酸，1 mg/L 激動素，0.2 mg/L吲哚丁酸。

4.根據權利要求1-3任意一項所述培養人參干細胞的方法，其特征在于，步驟(2)中，取人參不定根的根尖部分，置于滲透劑溶液中低溫處理1-10小時。

5.根據權利要求4所述培養人參干細胞的方法，其特征在于，所述低溫溫度為1-6℃。

6.根據權利要求5所述培養人參干細胞的方法，其特征在于，所述低溫溫度為4℃。

7.根據權利要求4所述培養人參干細胞的方法，其特征在于，所述人參不定根的根尖部分的長度為0.3mm-0.8mm。

8.根據權利要求1-3任意一項所述培養人參干細胞的方法，其特征在于，所述滲透劑溶液選自蔗糖溶液、氯化鉀溶液、甘露醇溶液中的至少一種。

9.根據權利要求8所述培養人參干細胞的方法，其特征在于，所述滲透劑溶液為1mol/L的蔗糖溶液。

10.根據權利要求1所述培養人參干細胞的方法，其特征在于，步驟(3)中，干細胞誘導培養基包括1mg/L激動素，2.5 mg/L吲哚乙酸，1mg/L萘乙酸，75mg/L抗壞血酸，75mg/L檸檬酸，30g/L 蔗糖，3g/L植物凝膠，1.8g/L 1/2MS培養基，0.8g/L WPM培養基。