[發(fā)明專利]一種培養(yǎng)人參干細胞的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110424760.5 | 申請日： | 2021-04-20 |
| 公開（公告）號： | CN113046293B | 公開（公告）日： | 2023-01-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 高秀君;劉冰;張明臣;閆培生 | 申請（專利權(quán)）人： | 山東安然納米實業(yè)發(fā)展有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/04 | 分類號： | C12N5/04;A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京元中知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11223 | 代理人： | 李達寬 |
| 地址： | 264205 山東省*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 培養(yǎng) 人參 干細胞 方法 | ||
1.一種培養(yǎng)人參干細胞的方法，其特征在于，包括：
(1)將成熟人參清洗消毒，切片，接種到不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出人參不定根；將獲得的人參不定根再次接種到不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)擴繁；然后將擴繁獲得的人參不定根接種到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得人參不定根；所述不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為1-6mg/L萘乙酸，0.1-0.6mg/L激動素，0.2-1mg/L赤霉素，0.075-1.5g/L檸檬酸，0.03-1g/L抗壞血酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝膠，1-4g/L B5培養(yǎng)基和1-2.4g/L WPM培養(yǎng)基；
(2)將步驟(1)制得的人參不定根取根尖部分，置于滲透劑溶液中處理；
(3)將步驟(2)經(jīng)滲透劑溶液處理的人參不定根根尖置于干細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后轉(zhuǎn)入擴繁培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得人參干細胞；所述干細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為0.6-1mg/L激動素，2-4mg/L吲哚乙酸，0.5-1.5mg/L萘乙酸，25-100mg/L抗壞血酸，50-150mg/L檸檬酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝膠，1-2.4g/L 1/2MS培養(yǎng)基，0.6-1.4g/L WPM培養(yǎng)基；
所述擴繁培養(yǎng)基的組成為2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L萘乙酸，0.8-1.2mg/L激動素，20-60g/L蔗糖，3g/L植物凝膠，1-2.4g/L 1/2MS培養(yǎng)基和0.6-1.4g/L WPM培養(yǎng)基；
(4)將步驟(3)獲得的人參干細胞轉(zhuǎn)入干細胞液體培養(yǎng)基，暗培養(yǎng)獲得人參干細胞；
干細胞液體培養(yǎng)基的組成為2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L赤霉素，0.8-1.2mg/L激動素，20-60g/L蔗糖，1-2.4g/L 1/2MS培養(yǎng)基和0.6-1.4g/L WPM培養(yǎng)基；所述步驟(1)中所使用的液體培養(yǎng)基的組成為：10-55g/L蔗糖，0.6-1.6g/L B5培養(yǎng)基，0.3-1.2g/L 1/2MS培養(yǎng)基，1.8-5.4mg/L 6-芐氨基腺嘌呤，0.6-5.4mg/L萘乙酸，0.8-8mg/L赤霉素，0.6-5.4mg/L吲哚乙酸，0.6-5.4mg/L吲哚丁酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述培養(yǎng)人參干細胞的方法，其特征在于，步驟(1)所述液體培養(yǎng)基的組成為15-45g/L蔗糖，0.8-1.3g/L B5培養(yǎng)基，0.5-1.0g/L 1/2MS培養(yǎng)基，1.8-4.2mg/L6-芐氨基腺嘌呤，1.8-5.4mg/L萘乙酸，0.8-8mg/L赤霉素，0.6-4.8mg/L吲哚乙酸，0.6-3.6mg/L吲哚丁酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述培養(yǎng)人參干細胞的方法，其特征在于，步驟(1)所述液體培養(yǎng)基的組成為45g/L蔗糖，1.28g/L B5培養(yǎng)基，0.905g/L 1/2MS培養(yǎng)基，4.2mg/L 6-芐氨基腺嘌呤，3mg/L萘乙酸，0.8mg/L赤霉素，0.6mg/L吲哚乙酸，0.6mg/L吲哚丁酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述培養(yǎng)人參干細胞的方法，其特征在于，步驟(2)中，取人參不定根的根尖部分，置于滲透劑溶液中低溫處理1-10小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述培養(yǎng)人參干細胞的方法，其特征在于，所述低溫溫度為1-6℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述培養(yǎng)人參干細胞的方法，其特征在于，所述低溫溫度為4℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述培養(yǎng)人參干細胞的方法，其特征在于，所述人參不定根的根尖部分的長度為0.3mm-0.8mm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述培養(yǎng)人參干細胞的方法，其特征在于，所述滲透劑溶液選自蔗糖溶液、氯化鉀溶液、甘露醇溶液中的至少一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述培養(yǎng)人參干細胞的方法，其特征在于，所述滲透劑溶液為1mol/L的蔗糖溶液。
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