[發(fā)明專利]一種葶藶子中槲皮素糖苷的純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110421443.8
• 申請(qǐng)日: 2021-04-20
• 公開（公告）號(hào): CN113150052B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李桂生;周蘭英;馬成俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 煙臺(tái)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07H17/07
• 分類號(hào): C07H17/07;C07H1/08;C07H1/06
• 代理公司: 煙臺(tái)雙聯(lián)專利事務(wù)所(普通合伙) 37225
• 代理人: 王娟

本發(fā)明公開了一種葶藶子中槲皮素糖苷的純化方法。所述方法包括以下步驟：（1）葶藶子中槲皮素?3?O?β?D?葡萄糖?7?O?β?D?龍膽雙糖苷的初步水提取；（2）葶藶子水提物醇沉除雜；（3）LX?68G型大孔樹脂洗脫分離；（4）CM?瓊脂糖凝膠FF柱洗脫純化；（5）制備型液相純化得到槲皮素?3?O?β?D?葡萄糖?7?O?β?D?龍膽雙糖苷單體化合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：CM?瓊脂糖凝膠FF對(duì)槲皮素?3?O?β?D?葡萄糖?7?O?β?D?龍膽雙糖苷有良好的純化效果，再經(jīng)過制備型液相分離純化的樣品純度可達(dá)到99.0%以上，符合國家中藥對(duì)照品大于98.5%的技術(shù)要求，可做為中藥對(duì)照品應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種葶藶子中槲皮素糖苷的純化方法，涉及葶藶子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷的純化工藝。

背景技術(shù)

葶藶子為十字花科播娘蒿或獨(dú)行菜的干燥成熟種子，前者習(xí)稱“南葶藶子”，后者習(xí)稱“北葶藶子”。葶藶子在中醫(yī)學(xué)中一般不作為君藥應(yīng)用于方劑中，一般作為佐使藥或單味藥使用，且常常用于治療多種原因引起的肺熱咳喘。在現(xiàn)代臨床應(yīng)用中，多用于中藥復(fù)方中和其他藥物配合使用，用于心血管疾病、呼吸系統(tǒng)疾病的治療。

槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷為南葶藶子中的特征成分，在2020版《中國藥典》中用于鑒別和標(biāo)定南葶藶子。文獻(xiàn)查詢，南葶藶子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷的分離純化工藝一般為大孔樹脂、聚酰胺等方式分離后，再經(jīng)硅膠柱層析或者SephadexLH-20，對(duì)槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷的分離不完全，純度較低，很難達(dá)到國家中藥對(duì)照品純度為98.5%的技術(shù)要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種葶藶子中槲皮素糖苷的純化方法。本發(fā)明選用CM-瓊脂糖凝膠FF柱用于分離純化，提高了葶藶子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷含量，為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷的對(duì)照品的制備，奠定了良好的基礎(chǔ)。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種葶藶子中槲皮素糖苷的提取方法，采用CM-瓊脂糖凝膠FF柱分離提取葶藶子中槲皮素糖苷，并且所述葶藶子中槲皮素糖苷為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷，然后結(jié)合制備型液相得到槲皮素糖苷單體化合物。

優(yōu)選，一種葶藶子中槲皮素糖苷的提取方法，步驟如下：

S1、取葶藶子干燥種子與去離子水混合水浴加熱提取，提取溫度80℃，水浴時(shí)間1～2h，重復(fù)提取三次后合并濾液，濾液濃縮后噴霧干燥即得干燥后樣品；

S2、取干燥后樣品用60%乙醇超聲溶解15～45min，靜置20～30h后過濾，濾液濃縮后凍干，得凍干樣品；

S3、取凍干樣品用pH 4.5的酸水超聲5min溶解，于活化的LX-68G型大孔樹脂上樣，上樣后靜置1～2h，去離子水洗脫1～2個(gè)柱體積后，依次用10%乙醇、20%乙醇梯度洗脫，洗脫流速為1～2mL/min，洗脫過程中HPLC實(shí)時(shí)檢測(cè)，待HPLC圖譜顯示雜質(zhì)峰值降低至其峰高最大值的1/10時(shí)換下一洗脫梯度洗脫，收集20%乙醇洗脫液，濃縮后凍干，得提取物；

S4、取提取物，30%甲醇配制濃度為0.06～0.08mg/mL的溶液，超聲3～5min溶解，用滴管吸取后緩慢均勻的鋪展于再生后CM-瓊脂糖凝膠FF柱表面，30%甲醇以15～25mL/min的流速洗脫，HPLC實(shí)時(shí)檢測(cè)洗脫液中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷的含量變化，當(dāng)HPLC圖譜顯示有槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷時(shí)，收集洗脫液，濃縮后凍干，得粗提物；