[發(fā)明專利]一種直接競爭ELISA法快速檢測AFB1 在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110420442.1 | 申請日： | 2021-04-19 |
| 公開（公告）號： | CN113125734A | 公開（公告）日： | 2021-07-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 余厚美;張振文;李其鑄;王琴飛;林立銘;徐緩 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/543 |
| 代理公司： | 海南盛億專利代理事務(wù)所(普通合伙) 46005 | 代理人： | 陳景帥 |
| 地址： | 571101 *** | 國省代碼： | 海南;46 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 直接 競爭 elisa 快速 檢測 afb base sub | ||
本發(fā)明公開了一種直接競爭ELISA法快速檢測AFB1的方法及其試劑盒，屬于黃曲霉素B1檢測領(lǐng)域。本發(fā)明成功制備了抗原和單克隆抗體，并建立了直接競爭ELISA法，該方法能檢測木薯粉和木薯制品如木薯餅干、木薯蛋糕、木薯粉條、木薯面條等樣品中的AFB1，也能檢測其他糧食樣本中的AFB1。該方法具有靈敏度高、操作簡單、快速、準(zhǔn)確、可批量檢測樣本等特點(diǎn)，易于被企業(yè)和基層檢測人員掌握和應(yīng)用。該檢測方法為食品中AFB1污染篩查提供快速檢測技術(shù)，為食品的加工利用和產(chǎn)業(yè)化推廣提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及黃曲霉素B1檢測領(lǐng)域，具體涉及一種直接競爭ELISA法快速檢測AFB1的方法及其試劑盒。
背景技術(shù)
黃曲霉毒素(Aflatoxins)是黃曲霉菌及曲霉寄生菌族類產(chǎn)生的一類結(jié)構(gòu)類似物的總稱，在各種糧食、食品、和飼料中廣泛存在，且理化性質(zhì)穩(wěn)定，現(xiàn)有的農(nóng)業(yè)技術(shù)和食品加工工藝無法避免和消除污染。其中黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)毒性和“三致”(致癌、致畸、致突變)均居首位。歐盟規(guī)定AFB1含量不得高于2μg/kg，我國國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定糧食中AFB1含量不得超過5μg/kg，特殊膳食用食品不得超過0.5μg/kg(GB 2761-2017)。
木薯是一種重要的塊根糧食作物，世界木薯全部產(chǎn)量的65％左右用于人類食物。中國是世界木薯第一進(jìn)口大國，我國現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.22-2016第五法中AFB1在薯干中的檢出限是5μg/kg。因此，制備抗原和單克隆抗體，利用ELISA抗原抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)檢測原理，建立高靈敏度的檢測方法檢測木薯粉及其制品中AFB1，對木薯粉及其食品制品的推廣和木薯食用化利用有重要的意義。
檢測AFB1含量的方法主要是液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等儀器方法和ELISA、免疫層析試紙條等快速檢測方法。儀器方法雖然靈敏、準(zhǔn)確，但儀器昂貴，耗時(shí)長等，不能滿足基層對大量樣本的篩查。ELISA利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，具有靈敏度高、通量大、耗時(shí)短、成本低等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于源頭監(jiān)測和成規(guī)模的樣本篩查。如蔣佳伊等(2020)用ELISA檢測中藥中AFB1，線性范圍0.05～0.58μg/kg，檢測限達(dá)1.69μg/kg，與UHPLC-MS/MS檢測結(jié)果符合良好；真菌毒素污染廣泛，王國強(qiáng)等(2019)對來自不同省份的飼料及其原料檢測發(fā)現(xiàn)所有樣本都有被污染，同時(shí)被三種以上毒素污染的樣本高達(dá)76.55％；在喀麥隆、坦桑尼亞、尼日利亞等有木薯中檢測出AFB1的報(bào)道；雖然國內(nèi)外己有AFB1的很多快速檢測產(chǎn)品出現(xiàn)，但是目前黃曲酶素B1的酶聯(lián)免疫分析方法的精密度較低，且沒有針對木薯粉等糧食及其制品樣品進(jìn)行分析的方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供一種靈敏度高、操作簡單、快速、準(zhǔn)確的直接競爭ELISA法檢測AFB1的方法；
本發(fā)明的另一目的在于提供一種直接競爭ELISA法快速檢測AFB1的試劑盒。
本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：一種直接競爭ELISA法快速檢測AFB1的方法，它包括以下步驟：
S1、樣本處理：將樣本進(jìn)行烘干粉碎，過篩后準(zhǔn)確稱取樣本，每克樣本用5ml 70％甲醇水溶液，加樣本質(zhì)量10％質(zhì)量的氯化鈉提取，若樣本不含油脂，取上清液2倍稀釋后檢測，若樣本含油脂，取上清液加入正己烷，所述上清液和正己烷的體積比為1:0.8，震蕩離心后取下層上清液2倍稀釋后檢測；
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