[發明專利]從含有核酸的樣品中分離核酸的方法及用于該方法的樣品處理試劑

在審

• 申請號: 202110410281.8
• 申請日: 2016-09-09
• 公開（公告）號: CN113122535A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 岡島基范;西園貴志;宮本重彥;田中穂積
• 申請（專利權）人: 株式會社鐘化
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王靈菇

本發明提供從含有核酸的樣品中分離核酸的方法及用于該方法的樣品處理試劑。所述樣品處理試劑含有：0.5重量％～15重量％的選自N?乙酰基?L?半胱氨酸、L?半胱氨酸乙酯、L?半胱氨酸甲酯、N?乙基?L?半胱氨酸、N?甲基?L?半胱氨酸和它們的鹽中的至少一種硫醇系還原劑；3重量％～20重量％的選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋇及氫氧化鈣中的至少1種堿性物質；和20重量％～80重量％的乙醇。所述方法為在所述樣品處理試劑與所述樣品的混合物的存在下、使從所述樣品游離的核酸吸附在含有二氧化硅的載體上。

本申請是申請日為2016年9月9日、優先權日為2015年9月10日、中國專利申請號為201680062710.4、發明名稱為“從含有核酸的樣品中分離核酸的方法及用于該方法的裝置”的分案申請。

技術領域

本發明涉及從生物體試樣等含有核酸的樣品中分離核酸的方法。本發明還涉及用于從含有核酸的樣品中分離核酸的裝置。

背景技術

基因檢查通過對核酸進行解析，能夠高靈敏度且在短時間內對結果進行判定，是在醫療、農畜水產、品質檢查等多種領域中應用的產業上重要的檢查方法。為了該檢查，需要從樣品中對核酸進行洗脫、精制，作為核酸精制法，最為常用的是應用了在促溶劑的存在下、核酸與核酸吸附性載體相結合的性質的結合-洗脫法(專利文獻1、2)。該精制法由所下述工序構成：(a)溶解工序：樣品的溶解和核酸的溶解析出、(b)吸附工序：核酸吸附性載體與核酸的結合、(c)洗滌工序：結合于核酸吸附性載體的核酸的洗滌、(d)溶解析出工序：核酸的溶解析出；特別是與吸附柱組合的方法是能夠精制高純度核酸的優異方法。

但是，該方法需要熟練的研究者在設備齊備的實驗室等中使用離心機或微量移液器、旋渦混合器、培養箱等理化學機器進行作業，是技術難度高的作業。實際上，在需要進行基因檢查的醫療、農畜水產、食品等領域中，不具備具有所需技術的人才或設備的機構也很多。這種機構中，實際情況是將本來能夠在短時間內進行結果判定的基因檢查委托至花費時間和費用的外單位，無法充分地發揮作為基因檢查特征的結果判定的迅速性。

另外，成為基因檢查對象的樣品多是病毒或細菌等具有病原性的物質，對檢查作業者的感染風險經常成為問題。因此，基因檢查多需要使用對應于生物安全等級的裝備、設備，這些設備或裝備的使用對于不需要其的情況而言，是非常繁瑣的操作。實際情況是會對作業者造成很大的負擔。

專利文獻3中公開了使含有自樣品溶解析出的核酸的核酸提取液接觸于沸石、使不需要的物質吸附在沸石上，對核酸進行精制的方法，但該方法不具有如結合-洗脫法那樣對核酸進行濃縮精制的能力，存在依賴于樣品中的核酸濃度的課題。另外，能夠吸附除去的雜質是有限的，精制度比結合-洗脫法差，在代替結合-洗脫法方面技術水平還不足。

專利文獻4中公開了用于痰中所含抗酸桿菌的基因檢測的前處理方法。該方法的目的是從痰中將抗酸桿菌的菌體分離，而并非是從痰中對基因(核酸)進行提取的方法。

專利文獻5中公開了適于自動化及小型化、使用了核酸吸附性多孔性膜的核酸的分離精制方法。專利文獻5中作為核酸吸附性多孔性膜，其特征在于使用核酸以與離子鍵實質上無關的相互作用吸附的多孔性膜。專利文獻5的方法仍無法解決現有的結合-洗脫法的上述課題。

專利文獻6中公開了用于使溶液中的核酸吸附在固相載體上的促溶劑的組成。但是，專利文獻6中未公開用于解決現有的結合-洗脫法的上述課題的手段。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2001-78790號公報

專利文獻2：日本特表2014-526255號公報

專利文獻3：國際公開WO2009/060847

專利文獻4：日本特開2009-100688號公報