[發明專利]一種小麥抗白粉病基因Pm12的功能KASP分子標記的引物及其應用

有效

• 申請號: 202110409836.7
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113106165B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 劉開昌;劉成;馬朋濤;張旭;王江春;李林志;宋文月
• 申請（專利權）人: 煙臺大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 廣州立凡知識產權代理有限公司 44563
• 代理人: 白利霞

1.一種小麥抗白粉病基因Pm12的功能KASP分子標記的引物，所述KASP分子標記為KASP-Pm12，該標記是根據基因Pm12的第3156個堿基設計的KASP-Pm12的引物擴增DNA模板所獲得的核苷酸序列，所述基因Pm12的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述KASP-Pm12的引物包括擬斯卑爾托山羊草等位型上游引物KASP-Pm12-F，小麥等位型上游引物KASP-Pm12-H和共用下游引物KASP-Pm12-C，

所述上游引物KASP-Pm12-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述上游引物KASP-Pm12-H的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

所述共用下游引物KASP-Pm12-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根據權利要求1所述的小麥抗白粉病基因Pm12的功能KASP分子標記的引物，其特征在于，標有FAM熒光信號的擬斯卑爾托山羊草等位型上游引物KASP-Pm12-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，標有HEX熒光信號的小麥等位型上游引物KASP-Pm12-H核苷酸序列如SEQID NO:6所示。

3.權利要求1所述的一種小麥抗白粉病基因Pm12的功能KASP分子標記的引物在鑒定小麥-擬斯卑爾托山羊草后代及其它小麥品種中是否存在Pm12基因的應用，所述其它小麥品種為攜帶Pm21的6VS易位系小麥品種揚麥18，攜帶PmV的6VS易位系小麥品種揚麥22，攜帶已知抗白粉病基因的材料Ulka/8*Cc、Tabasco、良星66、D57-5D、NCD7、NCD3、汶農14、中麥155、濟麥22、嬰泊700、紅柚麥、游白蘭、大紅頭、Aquila、復壯30、2H7165、IW170和紅卷芒，不攜帶抗病基因Pm12的感病材料煙187、山農1538、邯麥13、淮麥226、周麥27、煙農1212、西農979、魯辰185、中育1311、濟麥268、濟麥229、濟麥21、濟麥20、岱麥2173、中麥1751、濟南17、中麥9398、渦麥8、良星619、淮麥0226、青麥6、鄭麥0856、泰農18、蘭德677、武農6、泰麥1918、藁優5788。

4.一種鑒定小麥材料中含有基因Pm12的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）提取待測樣品一葉期葉片的DNA，作為擴增模板；

（2）利用引物對DNA模板進行PCR擴增，得擴增產物；上游引物包括標有FAM熒光信號的擬斯卑爾托山羊草等位型上游引物、和標有HEX熒光信號的小麥等位型上游引物，核苷酸序列分別如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示；公用下游引物KASP-Pm12-C，核苷酸序列如SEQID NO:4所示；

（3）PCR擴增產物基因型采用熒光定量PCR檢測儀進行分析：37℃下測量熒光信號，利用Bio-Rad CFX Manager 3.1讀取分型結果。

5.根據權利要求4所述的鑒定小麥材料中含有基因Pm12的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系為20.0μL體系，包括：20 ng/μLDNA 6.0μL，2×KASP Maseter Mix 11.25μL，引物混合液0.35μL，ddH₂O2.4 μL；所述引物混合物中兩條上游引物工作液濃度均為12μM；共用下游引物KASP-Pm12-C工作液濃度為30 μM。

6.根據權利要求4或5所述的鑒定小麥材料中含有基因Pm12的方法，其特征在于，所述PCR擴增的程序為：94℃預變性15分鐘；94℃變性20秒，64℃梯度退火并延伸60秒，10個循環，每個循環退火及延伸的溫度降低0.6℃；94℃變性20秒，58℃退火并延伸60秒，38個循環。