[發(fā)明專利]用于降鈣素原檢測的組合物及應用和磁微球電化學發(fā)光免疫檢測試劑盒與檢測方法

在審

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• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN113125761A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設計）人: 秦軍;謝元東;謝良思;王曉寧;黃夢園
• 申請（專利權）人: 江蘇優(yōu)尼泰克生物科技有限公司;北京聯(lián)眾泰克科技有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 北京思創(chuàng)大成知識產權代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

本發(fā)明涉及電化學檢測領域，特別涉及用于降鈣素原(PCT)檢測的組合物及應用和磁微球電化學發(fā)光免疫檢測試劑盒與檢測方法。本發(fā)明采用方法為電化學發(fā)光法，采用吡啶釕作為化學發(fā)光標記物具有明顯優(yōu)勢，主要表現(xiàn)在：靈敏度更好，穩(wěn)定性更好，釕是金屬離子，分子量小，不影響抗體的空間位阻。生產過程短，重復性好，檢測范圍寬。電化學發(fā)光反應可控，降低信號采集難度。

技術領域

本發(fā)明涉及電化學檢測領域，特別涉及用于降鈣素原(PCT)檢測的組合物，該組合物的應用，包含該組合物的磁微球電化學發(fā)光免疫檢測試劑盒，以及基于該組合物或試劑盒的磁微球電化學發(fā)光免疫檢測方法。

背景技術

PCT是降鈣素的前體、由116個氨基酸組成、分子量為12.7kDa的糖蛋白。PCT由N-ProCT、未成熟降鈣素和骨鈣素組成。PCT主要是在細菌毒素和炎性細胞因子的誘導刺激下產生，因此在病毒感染或自身免疫性疾病時水平很低。血清PCT水平高低還反映疾病的嚴重狀態(tài)，也是判斷預后和評價療效的良好指標。

PCT對膿毒血癥診斷的特異性及敏感性更強，血液中的PCT含量可以輔助臨床醫(yī)生診斷膿毒血癥、重癥膿毒血癥和膿毒性休克。高濃度PCT水平常發(fā)現(xiàn)在嚴重膿毒血癥或膿毒性休克，多器官衰竭的患者中，死亡風險較高。低濃度PCT表明低的系統(tǒng)性炎癥反應，炎癥通常不是細菌感染所致或由局部細菌感染，死亡的風險低。

臨床可根據(jù)血液中PCT含量指導臨床抗生素的應用，也可用于長期機械通氣、免疫抑制劑使用和動靜脈插管患者感染的監(jiān)測。

到目前為止，用于檢測人血清中PCT的方法主要有：酶聯(lián)免疫法(ELISA)和酶促磁微?；瘜W發(fā)光。本發(fā)明采用方法為電化學發(fā)光法，采用吡啶釕作為化學發(fā)光標記物具有明顯優(yōu)勢，主要表現(xiàn)在：靈敏度更好，穩(wěn)定性更好，釕是金屬離子，分子量小，不影響抗體的空間位阻。生產過程短，檢測范圍寬，重復性好。電化學發(fā)光反應可控，降低信號采集難度。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種用于降鈣素原(PCT)檢測的組合物及應用和磁微球電化學發(fā)光免疫檢測試劑盒與檢測方法，具有生產效率高、檢測時間短、適用于全自動檢測，具有更高的靈敏度、線性范圍寬等優(yōu)點。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案：

本發(fā)明提供了用于降鈣素原(PCT)檢測的組合物，包括PCT試劑Ra、PCT試劑Rb、鏈霉親和素超順磁微球；

所述PCT試劑Ra包括含生物素標記的抗PCT單克隆抗體；

所述PCT試劑Rb包括含三聯(lián)吡啶釕標記的抗PCT單克隆抗體；

所述鏈霉親和素超順磁微球包括表面包裹帶有鏈霉親和素的超順磁微球。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述超順磁微球的粒徑在1.5～5.0μm。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述PCT試劑Ra中，每個抗體分子表面的生物素分子標記量為2～5個；所述PCT試劑Rb中，每個抗體分子表面的釕分子標記量為2～10個。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述PCT試劑Ra的制備方法為：在緩沖液存在的條件下，取抗PCT單克隆抗體與生物素混合，制得所述PCT試劑Ra；所述緩沖液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸鹽緩沖液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述PCT試劑Ra的制備方法為：取2.0mg的用于標記生物素降鈣素原(PCT)抗體，使用脫鹽柱PD10更換緩沖液為磷酸鹽緩沖液(pH＝7.8)，使用超濾管濃縮后調整濃度為2.0mg/mL，加入80μg的生物素(使用DMF溶解)，混勻反應30分鐘，使用脫鹽柱PD10去除未標記的生物素。使用含1％的牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液(pH＝7.4)稀釋標記生物素的降鈣素原(PCT)抗體到1mg/L，作為PCT試劑Ra。