[發(fā)明專利]基于LEAPER技術(shù)靶向編輯RNA的方法和藥物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110407301.6
• 申請(qǐng)日: 2021-04-15
• 公開（公告）號(hào): CN113528582B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁鵬飛;趙艷霞;劉能銀;易澤軒;湯剛彬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 博雅輯因（北京）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/87
• 分類號(hào): C12N15/87;C12N15/56;C12N15/113;A61K48/00;A61P3/00
• 代理公司: 北京彩和律師事務(wù)所 11688
• 代理人: 張紅春

1.一種基于LEAPER技術(shù)靶向編輯細(xì)胞中靶標(biāo)RNA的方法，其中所述靶標(biāo)RNA包含含有鳥苷(G)到腺苷(A)突變位點(diǎn)(靶標(biāo)腺苷)的α-L-艾杜糖醛酸酶(α-L-iduronidase，IDUA)的基因轉(zhuǎn)錄本序列，所述突變位點(diǎn)是NM_000203.4(IDUA)-c.1205GA(p.Trp402Ter)或其相應(yīng)的突變位點(diǎn)，該方法包括：

將arRNA或包含所述arRNA編碼序列的構(gòu)建體導(dǎo)入所述細(xì)胞中，其中所述arRNA包含與所述靶標(biāo)RNA雜交的互補(bǔ)RNA序列，并且其中所述arRNA與所述靶標(biāo)RNA雜交后能夠招募作用于RNA的腺苷脫氨酶(ADAR)以使靶標(biāo)RNA中的靶標(biāo)腺苷脫氨基；

其中所述arRNA長(zhǎng)度≥61nt且＜111nt；并且所述arRNA的靶向核苷距離所述arRNA的3’末端的距離不小于9nt，所述靶向核苷距離所述arRNA的5’末端的距離不小于25nt。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述arRNA上與靶標(biāo)腺苷相對(duì)的核苷(靶向核苷)為胞苷(C)、腺苷(A)或尿苷(U)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述靶標(biāo)腺苷與其5’最近鄰核苷和3’最近鄰核苷組成靶標(biāo)三聯(lián)體，該靶標(biāo)三聯(lián)體為5’-UAG-3’。

4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述靶向核苷的5’最近鄰核苷為C、G或U。

5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述靶向核苷的3’最近鄰核苷為A。

6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述靶向核苷與其5’最近鄰核苷和3’最近鄰核苷組成靶向三聯(lián)體，該靶向三聯(lián)體為5’-CCA-3’。

7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述arRNA的靶向核苷距離所述arRNA的3’末端的距離小于所述靶向核苷距離所述arRNA的5’末端的距離。

8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述arRNA的靶向核苷距離其3'末端為選自9nt-60nt中的任一整數(shù)個(gè)nt。

9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述arRNA的靶向核苷距離其5’末端為選自25nt-60nt中的任一整數(shù)個(gè)nt。

10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述arRNA選自下述任一長(zhǎng)度特征的arRNA：

55nt-c-35nt、55nt-c-25nt、55nt-c-24nt、55nt-c-21nt、55nt-c-20nt、55nt-c-19nt、55nt-c-18nt、55nt-c-17nt、55nt-c-16nt、55nt-c-15nt、55nt-c-14nt、55nt-c-13nt、55nt-c-12nt、55nt-c-11nt、55nt-c-10nt、55nt-c-9nt、50nt-c-20nt、50nt-c-15nt或45nt-c-20nt，其中C為arRNA中與靶標(biāo)腺苷相對(duì)的靶向核苷，arRNA的方向?yàn)?’至3’的方向。

11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述arRNA選自下述任一長(zhǎng)度特征的arRNA：55nt-c-20nt、55nt-c-15nt、55nt-c-14nt。

12.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述arRNA包含一種或多種化學(xué)修飾。

13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述化學(xué)修飾選自如下的一種或多種：2’-O-甲基化修飾、核苷酸間連接的硫代磷酸酯修飾、脫氧核糖核苷替代修飾、LNA修飾、2’-O-(2-甲氧乙基)修飾。