[發明專利]一種外源基因瞬時轉化楊樹莖段的方法有效
| 申請號： | 202110406728.4 | 申請日： | 2021-04-15 |
| 公開（公告）號： | CN113388636B | 公開（公告）日： | 2022-12-09 |
| 發明（設計）人： | 盧孟柱;安軼;李曉軍 | 申請（專利權）人： | 浙江農林大學 |
| 主分類號： | C12N15/84 | 分類號： | C12N15/84;C12N15/65 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 | 代理人： | 段卉 |
| 地址： | 310006 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基因 瞬時 轉化 楊樹 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種外源基因瞬時轉化銀腺楊無性系84k楊樹莖段的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1.利用菌體懸浮液重懸活化后的農桿菌菌體，得到侵染用菌液；所述菌體懸浮液為含有25 g/L蔗糖，10 mmol/L MES，200 μmol/L AS，pH值為5.6的1/2MS；
S2.將4～6℃保存的莖段在含20～30%蔗糖的1/2MS溶液中浸泡1～3h；
S3.將步驟S2浸泡過的莖段放入有侵染用菌液的容器中，莖段形態學下端浸入侵染用菌液中，形態學上端與抽真空裝置的抽真空通路密封連接；即莖段形態學上端通過橡膠管與抽真空裝置的抽真空通路的抽氣口通過氣管密封連接；
S4.抽真空處理，侵染用菌液從莖段形態學下端抽至形態學上端以侵染莖段；
S5.步驟S4轉化完畢的莖段進行水培。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1中，侵染用菌液的OD值為0.3～1.5。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S4中，0 .08MPa壓強下，抽真空處理5到30分鐘。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S4中，抽真空處理1～5次，兩次之間間隔1～3天。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S5中，水培9～25天。
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